GSTcatenin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达.pdf

解剖学研究 年第 卷第 期 104 2015 37 2 Anat Res, 2015, Vol． 37, No．2 ·论著 · GST-β-catenin 融合蛋白表达载体的构建及其在 原核细胞中的表达 梁 峰 沈 涛 姚 强 贾长青 ， ， ， 中国医科大学附属盛京医院骨一科 辽宁沈阳 （ ， 110004） 摘要 目的 构建 融合蛋白表达载体 并在大肠埃希菌 中诱导表达 方法 从 细胞中 【 】 GST-β-catenin ， （E．col ） 。 COS-7 提取 反转录为 用 方法扩增出 基因全长 通过 和 酶切位点将其定向插入 mRNA ， cDNA 。 PCR β-catenin ， BamHI SalI pGEX-4T- 载体中 构建原核表达质粒 并转化 通过限制性内切酶酶切电泳和 测序鉴定正 2 ， pGEX-4T-2- β-catenin ， E．coli DH5α ， DNA 确后 转入 中 经异丙基硫代 半乳糖苷大量诱导表达 电泳和 鉴定 结果 酶切 ， E．coli BL21 ， β-D ，SDSWestern blot 。 电泳及测序结果证明 成功构建了原核表达质粒 并用 方法证实了 融合蛋白的 ， GST-β-catenin ， Western blot GST-β-catenin 表达 结论 成功构建了 原核表达载体 并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达 为进一步纯化 。 GST- β-catenin ， ， β-catenin 及研究其结构与功能提供了前提基础。 关键词 原核表达 融合蛋白 【 】 β-catenin ； ； Construction of GST-β-catenin fusion protein expression ve