氨基酸突变对细胞色素P450 BM-3羟基化吲哚能力的影响.pdfVIP

第22卷第2期 高校化学工程学报 No．2V01．22 文章编号：1003-9015(2008)02-0282-06 BM．3羟基化吲哚能力的影响 氨基酸突变对细胞色素P450 李红梅1，一，梅乐和1，一，高舜晔1 3．上海理工大学食品与生物技术研究所，上海200093) 摘要：利用饱和定点突变技术对细胞色素P450 突变，根据其羟基化碍l哚生成的靛蓝在-．670姗处具有特殊吸收峰进行高通量筛选，获得了三个高于亲本酶(P1)的突变 酶D168H、D168L和E435T．通过考察突变酶反应动力学参数、电子耦合率、热稳定性、最适pH以及区域专一性的变 化情况，发现相对亲本酶而言所有的突变酶对底物吲哚的亲和力和催化效率都得到了不同程度的提高，其中突变酶 8．2附近表现出最大羟基化吲哚生产靛蓝的能力；突变醣iDl68H对 的电子耦合率却有轻微的提高：所有突变酶均在pH 吲哚的区域选择性得到了提高，主产物靛蓝从亲本酶的72％提高到了93％。另外，热稳定性实验表明：尽管突变酌fDl68H 和D168L的热稳定性较亲本酶有所降低，但活力的大幅度提高并未对酶的热稳定性造成大的伤害。以上所有的结果为 了解细胞色素P450BM-3结构与功能关系提供了有用的信息，同时为进一步定向进化P450BM．3提高其功能特性提供了 进化模板。 关键词：细胞色素P450 BM．·3；饱和定点突变；羟基化吲哚；靛蓝 中图分类号：TQ962．2；Q559．9 文献标识码：A AminoAcidMutationEffecton of Indole,-HydroxylatingAbility P450BM一3 Cytoehrome LI Le-helt一，GAO Hong．meil，一，MEI Shun-yel andBiochemical (1．DepartmentofChemical Engineering,．Zhejiang Institute ofFoodScience 2．Ningbo ofTechnology，ZhejiangUniversity,Ningbo315100，．China；3．Institution and of forScienceand Biotechnology，UniversityShanghai Technology,Shanghai200093，China) mutantof P450 l demonstratedtohavethe Abstract：The仃ipleeytochromeBM一3(A74G／F87V／L88Q)was indolcinto and tOfurther abilityof jtmdirubin．Inorder hydroxylatingindigo improve：ttscatalyticcapabili戗two