第章免疫细胞分离.pptVIP

2002-3 第十三章免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用 第一节免疫细胞的分离 一、白细胞的分离 二、外周血单个核细胞的分离 聚蔗糖-泛影葡胺分层液法 Ficoll分层液分离PBMC示意图 三、淋巴细胞的纯化㈠ 红细胞的去除 ㈡ 血小板的去除 ㈢ 单核细胞的去除1、贴壁黏附法 2、吸附柱过滤法 3、磁铁吸引法 4、苯丙氨酸甲酯去除法 5、Percoll分离液法 Percoll分层液分离PBMC示意图 四、T细胞和B细胞的分离㈠ E花环沉降法 E玫瑰花环形成试验（光镜） E玫瑰花环形成试验（电镜） ㈡ 尼龙毛柱分离法 五、T细胞亚群的分离 ㈠ 亲和板结合分离法 ㈡ 磁性微球分离法 ㈢ 流式细胞术分离法 细胞分选原理 六、分离细胞的保存及活力测定 第二节淋巴细胞标志及亚群分类 淋巴细胞的形态 一、T细胞表面标志及亚群 ㈠ T细胞表面标志 T细胞表面标志及其功能 ㈡ T细胞亚群 二、B细胞表面标志 B细胞表面标志及其功能 表 B-1细胞与B-2细胞的异同 三、NK细胞表面标志 第三节其他的免疫细胞 常见标志 一、单核吞噬细胞系统（MPS） 单核细胞 表面标志 二、树突状细胞（DC） 树突状细胞 树突状细胞电镜照片 树突状细胞的来源 第四节免疫细胞表面标志的检测及应用 一、检测方法㈠ 花环技术 ㈡ 免疫细胞化学法 ㈢ 免疫荧光法 ㈣ 微量细胞毒试验 ㈤ 流式细胞分析法 二、临床意义 临床常见疾病中的T 淋巴细胞的变化 B细胞受体 mIg：抗原结合受体 致有丝分裂受体：LPS 、SPA、PWM IgG Fc受体（CD32） 补体受体 （CD21、CD35） 病毒受体（EB病毒受体） 细胞因子受体（IL-2受体） 表面标志 分布 配体 功能 CD19/ CD21/CD81 B细胞 C3d 辅助BCR识别抗原，参与活化信号转导 BCR 所有B细胞 游离抗原表位 特异性识别抗原，提供第一活化信号 （mIg-Igα/Igβ） 表面标志 分布 配体 功能 CD40 受抗原刺激的B细胞 CD40L 提供B细胞的第二活化信号 B7 活化B细胞 CD28 提供T细胞的第二活化信号 CD152 抑制T细胞活化 丝裂原受体 B细胞 丝裂原 非特异性激活B细胞 （SPA-R） （SPA） （CD80/CD86） B细胞亚群 根据发育早晚、存在部位、表面标志和功能的不同，可把B细胞分为 B1（CD5+ ）细胞：固有免疫 B2（CD5- ）细胞：适应性免疫 来源于骨髓淋巴样干细胞，主要存在于血和淋巴组织。 不表达特异性抗原识别受体，缺乏特异性的表面标志，临床将TCR-、mIg-、CD16+、CD56+ 淋巴细胞鉴定为NK细胞。 泛指所有参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及其前体细胞，主要包括造血干细胞、淋巴细胞、单核吞噬细胞及其他抗原提呈细胞、粒细胞、红细胞和肥大细胞。 1、CD11：属黏附分子，分布于MPS、粒细胞及NK细胞。 2、CD34：分布于造血干细胞、Cap内皮细胞及骨髓间质细胞。 3、CD62P：为P选择素，表达于血小板和内皮细胞。 4、CD83：表达于成熟DC、活化的B和T细胞。 抗原提呈细胞（APC）——指能摄取、加工、处理抗原，并将抗原信息提呈给T淋巴细胞的一类免疫细胞。 组成： 1、专职性APC：巨噬细胞（Mφ）、树突状细胞（DC）、B淋巴细胞。 2、非专职性APC：内皮细胞、纤维母细胞、上皮及间皮细胞等。 单核细胞（Mon） 骨 髓 血 液 组 织 多能干细胞 髓样干细胞 单核母细胞 前单核细胞 单核细胞 巨噬细胞 （Mφ） 结缔组织：组织细胞 肺：肺泡巨噬细胞 肝：枯否细胞 脾与淋巴结：游走与固定巨噬细胞 浆膜腔：胸、腹腔巨噬细胞 神经组织：小胶质细胞 骨：破骨细胞 关节：滑膜A型细胞 单核细胞体积较大，蹄状核（左，普通光镜）；透射电镜显示其高尔基体发达、粒体丰富、胞浆颗粒明显（中）；扫描电镜显示腹腔巨噬细胞粘附于玻璃表面（右）。 1、表面受体：种类很