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2015-09-17 发布于湖北
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Western blot 实验技术 Western Blot基本原理在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。一、实验原理 Western Blot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）。第二阶段：电转移。第三阶段：固相酶免疫测定。 * * 张蓓三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体（一）原理（二）材料 1、洗涤液：含0.05％吐温-20的pH7.4的PBS 2、酶标抗人IgG 3、阴性对照血清、阳性对照血清 4、底物溶液 5、终止液 6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、滴管、吸管等。（三）方法 1．次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。 2. 将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20μl血清混匀，37℃恒温摇动40min。 3．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 4．加入1ml酶标羊抗人IgG，37℃恒温摇动30min。 5．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 6．加入底物液1ml，显色10min。 7．加入终止液终止反应。 * * *