肝损伤实验报告.docVIP

急性肝损伤对药物作用的影响 实验组成员 学号 专业班级 得分 【目的】1、学习制作CCl4肝损伤模型。 2、观察肝损伤时对地西泮药效的影响。 3、观察肝损伤时肝脏大体病理形态的改变。 4、检测肝损伤时肝脏谷丙转氨酶（ALT）的活性。 【器材】紫外可见光分光光度计1台，恒温振荡水浴器1台，台式高速离心机1台，小鼠笼及饮水瓶2套，组织剪1把， 1ml注射器3只，250ml烧杯1只，一次性试管（5ml）6支，试管架4个，1.5mlEP管8个，苦味酸1瓶，冰块1盆，鼠料1包，垫料1包。 【药品】20% CCl4溶液，地西泮注射液，ALT（谷丙转氨酶）检测试剂盒，生理盐水200ml，蒸馏水100ml。 【动物】雄性昆明小鼠8只，体重25~30克。 【方法】每组4只小白鼠，饲养于同一鼠笼中。2只作为对照；2只作为CCL4肝损伤模型动物，以苦味酸号标记。 1、CCl4肝损伤动物模型的制作： 模型组小白鼠腹腔注射0.1ml/10g 的20%CCl4溶液 ，对照组小白鼠腹腔注射0.1ml/10g的生理盐水。饲养过夜。 2、CCl4肝损伤对地西泮催眠作用的影响： 24h后， 取对照组和模型组小白鼠各1只，分别腹腔注射5mg/ml地西泮50mg/kg。观察并记录其入睡时间（翻正反射消失时间）。 3、肝脏大体病理形态观察： 入睡小鼠颈椎脱臼处死，取肝脏制备：， 基质液（ul） 250 250 250 标准液（ul） — 50 — 样 品（ul） — — 50 蒸馏水（ul） 50 — — 混合后，37 ℃水浴30min 加显色剂250ul 37 ℃水浴20min 加0.4N NaOH 2.5ml 室温放置3min，510nm比色测定 ALT活性计算公式： C样=（A/A标）× C C：浓度（活性单位U/L）A：吸光度值 C标为100 U/L γ-氨基丁酸四氯化碳为一种化学药物，进入人体后，经由肝脏代谢后形成由强毒性的自由基CCl3.和Cl.，破坏细胞膜的结构，导致膜通透性增加，钠 -钾泵功能障碍，细胞内钠离子增多，水分增加。 CCl4是一种有毒的环境生物损害剂，在肝氧化代谢中可产生三氯甲基自由基，继而攻击脂质细胞膜，造成肝细胞脂质过氧化性损伤。CCl4可使小鼠血浆转氨酶活力明显上升，同时肝匀浆脂质过氧化产物MDA含量明显增加。四氯化碳、可干扰脂蛋白的合成与转运，形成脂肪肝。 3、CCl4肝损伤时肝脏ALT活性有何变化？为什么？ 答：CCl4肝损伤时肝脏ALT活性增强。 CCl4 肝毒作用机制是自由基的形成及引发的链式过氧化反应。CCl4在体内可经肝微粒体细胞色素P450 代谢激活,生成两个活性自由基(CCl3O2 和Cl) 及一系列氧活性物,可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化反应,膜磷脂大量降解,从而破坏细胞膜结构完整性,引起膜通透性增加,最终导致肝细胞死亡。 ALT是反映肝细胞损伤和线粒体膜损伤的重要指标，主要存在于细胞的可溶部分，正常情况下血清ALT活性极低，当肝细胞损伤时膜通透性增大，ALT释放入血而导致升高。