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第六章  肽的人工合成 前言 20世纪初，fischer 创立蛋白质的多肽结构学说 1932年，Bergmann采用苄氧羰酰基作为氨基保护基 同时期Curtius创立酰氯法，叠氮法活化羧基的肽键生成法 50年代初，Wieland等发展了活化酯法和混合酸酐法 1953年，Vigneaud首次化学合成了多肽激素催产素 1963年，Schwyzer合成24aa的促肾上腺皮质激素(ACTH) 1965年，我国合成51aa的牛胰岛素 1979年，矢岛治明液相法合成牛胰RNaseA(124aa) 80年代，Merrifield提出固相合成法；多肽合成仪不断发展 第一节 肽化学合成原理和液相合成 基本步骤： 1. ?-氨基和?-羧基以及侧链的保护 2. 羧基的活化和肽键的形成 3. 脱除保护基和纯化 Z2 Z1 Z2 Z1 XNHCHCOOH + H2NCHCOOY –H2O XNHCHCO-NHCHCOOY Z3 Z2 Z1 脱保护 XNHCHCOOH + H2NCHCO-NHCHCOOY Z3 Z2 Z1 缩合 XNHCHCO-NHCHCO-NHCHCOOY 保护基全脱除 三肽 一 氨基酸保护基 为了使肽键生成反应能够定向进行，需要对氨基酸的各种官能团进行保护 （一） ?-氨基保护基： 常用：烷氧羰基、酰基和烷基 （二） ?-羧基保护基 保护基种类相对较少 ?-羧基保护基种类： ①盐：钾盐、钠盐、三乙胺盐、三丁胺盐等 盐是对羧基的临时性保护 ②酯：甲酯和乙酯、苄酯、叔丁酯(最常用） （三）侧链的保护： 20种aa中有13种侧链需要保护 Lys-?-NH2 和侧链羧基:选择与?-氨基和羧基不同的保护基 Cys-SH: 甲基苄基、对氧苄基等（三氟乙酸铊/ TFA脱除) 羟基aa(Ser,Thr,Tyr)：苄基、叔丁基 酰胺基保护：2,4,6-三甲氧苄基等（可用TFA脱除） 二 肽键生成法 基本思路：使?-羧基活化为RCOX形式，加强羰基碳原子的正电性，便于?-氨基进行亲和攻击而成肽 （一）活化酯法： 方法： 采用巯基、烷基、酚基和N-羟胺类物质（最常用：N,N’-二环乙基碳二亚胺，DCC)与N-保护aa作用，使?-羧基活化为酯的形式，然后进行成肽反应。 优点： 中间产物可以分离、结晶、保存，便于去除副产物 氨基组分的末端羧基可以不保护 对酰胺基活化特别有效 （二） 缩合剂法： 重要的缩合剂：DCC, DIC(二异丙基DCC）等 DCC接肽反应机理： （三） 叠氮法： 是最古老的经典肽键生成法(1902年），该法最少引起消旋 O O O R-C-OCH3 H2NNH2 R-C-NHNH2 R’ NO2 R-C-N3 （酰化氨基酸酰肼） （酰化氨基酸叠氮） O H2N-R’ R-C-NH-R’ + 碱 · HN3 碱 （四）混合酸酐法： 50年代提出，简单、反应快、纯度好，尤其适合小肽合成 R1 R1 Z-NH-CH-COOH 叔胺(Et3N) Z-NH-CH-COO- Et3+NH R1 O O RO-COCl Z-NH-CH-C-O-C-OR H2N-R2 成肽（存在副反应） 三 脱保护基及纯化 （一）TFA法： 方法：将产物置于三氟乙酸(TFA)中处理，以脱除保