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人类X染色质小体的检测 【实验目的】 掌握人类X染色质小体的检测方法。 2．了解人类X染色质小体的形成机理，形态特征及所在部位。 【实验原理】 在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体。又称X小体，通常位于间期核膜边缘巴氏小体又称X小体正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。Lyon的剂量补偿学说认为女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。(dosage compensation effect) 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。 1949年M.L.Barr等研究发现雌猫神经元细胞核膜内有凝缩的深染小体，而 雄性个体细胞中则没有，这一结构被称为巴氏小体(Barr body)。进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中X染色质随机失活形成的，在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),贴近于核膜边缘的染色小体。 巴氏小体 X-染色质的形态特征及所在部位：X-染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体；轮廓清楚；大小1～1.5μm；常附着于核膜边缘或靠近内侧；形状为凸形，三角形，卵形，短棒及双球形等。正常女性口腔黏膜细胞中出现 率：30～50%。 【实验材料、器具与试剂】 1.实验材料 口腔粘膜细胞(个体较大，容易观察，但是容易污染细菌等杂质), 头发毛囊细胞(个体稍小，观察稍显困难，优点是不受细菌污染)。 2.实验器具 显微镜一台、解剖针、牙签、载玻片盖玻片2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。室温干燥3-5min，用HCl 水解3-5min，水洗3次，每次1min，再用硫堇染色20min，水洗去染料，显微镜观察；若染色过深或有大量染料结晶，可用95%乙醇分色3-5s，水洗去酒精，镜检。 毛囊细胞： 取带有发根的头发，长～ｃｍ，围绕发根部的１圈长～的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴。约后，毛囊细胞得到充分软化。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞另一干净载片上。0min（勿干）；水洗去染料，显微镜观察；若染色过深或有大量染料结晶，可用95%乙醇分色3-5s，水洗去酒精，镜检。 【实验结果及分析】 如上图，X染色质为一结构致密、轮廓清晰染色较深的小体。并且巴氏小体呈卵形，附着于核膜内侧，这个位置是晚复制的X染色体所处的位置。X染色质小体的以上特征是由于其在细胞分裂间期发生收缩，导致了异染色质化。 【注意事项】 1.在取口腔细胞时要先漱口，并弃去第一次取的细胞排除细菌的干扰。另外要小心取口腔细胞注意安全。 2.涂片之后要晾干材料再染色，防止材料丢失，在吸取染液时也要注意不要吸走材料。 3.在选取毛囊细胞时，尽量取毛囊大的，浅色的头发，这样课减少色素干扰。 4.染色时间不要太长,否则核质着色深,X染色质体不易区分。一旦染色时间过长，可用95%乙醇分色3-5s，水洗去酒精，再进行观察。 5.由于巴氏小体在男性细胞内出现的几率远小于女性细胞，所以实验时应选用女性的细胞作为材料，或者可用男性的细胞做为对照组。 巴氏小体