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疟原虫血检 渝水区疾病预防控制中心 2010.8 血片制作 所需用具 载玻片 玻片在使用前应清洗。新玻片的清洗方法，是先把玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再放入盛有清水的容器中换水3~4次，凉干，最后用干净的柔软的棉巾将玻片擦亮。用于特殊的目的时，最后可将玻片浸泡在95％工业乙醇5~10分钟，再将玻片擦干擦亮。已用过的玻片应先浸泡于或洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，逐个擦去玻片上的旧的血膜痕迹，用清水漂洗3~4次，再将玻片擦干擦亮。洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 采血针 一律使用一次性采血针。 玻片盒 为防止污染和苍蝇吸食血膜，新制作的血膜应放在玻片盒中，厚血膜放置时要保持水平，直到充分干燥。 75％乙醇棉球 用于采血前后的消毒。 记号笔、铅笔 用于玻片上写号码。 取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。 血膜的涂制 用于检查疟原虫的血涂片有两种： 薄血膜:是将血液涂呈薄膜状；薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。 厚血膜:是血液涂成圆盘。 薄血膜 取洁净的载玻片2张，1张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25~30度夹角，待血液向两侧扩展约2厘米长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5厘米长）。 厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。门诊和发热病人血片每片1人，涂1个厚血膜1个薄血膜. 血膜编号 血膜制成后，立即用记号笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。 涂制血膜的注意事项 涂制血膜时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。推片的边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，干前勿倾斜，以免造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。 血片染色 吉氏染液的配制 将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径3 -5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于室温内，每天用力摇动5分钟，3天后即可使用。 瑞氏染液的配制 将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。 此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应急血片时用。 吉氏染液染色方法 先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的