GFP标记溶磷草木樨中华根瘤菌CHW10B及其定殖.pdfVIP

第51卷第1期 林 业 科 学 V01．51．No．1 201 SCIENTIASILVAESINICAE 015 5年1月 Jan．，2 doi：10．11707／j．1001-7488 任嘉红1 刘 辉2 姜 楠1 魏玉宏1 张 冰1 王 莹1 (1．长治学院生物科学与技术系长治046011；2．安徽师范大学环境科学与工程学院芜湖241003) 摘要： 【目的】为有效利用草木樨中华根瘤菌CHWIOB菌株，对绿色荧光蛋白(GFP)标记的菌株在南方红豆杉 根际及其根部的定殖进行研究。【方法】采用修改的反复冻融转化方法，将穿梭载体pGFP4412质粒转化进人草木 樨中华根瘤菌CHWl0B细胞，对该菌株进行GFP标记，筛选荧光表达强烈且稳定遗传的转化子，对转化子的细胞 及菌落形态特征进行观察，并采用钼锑抗比色法对其溶磷能力进行测定。在此基础上，以GFP基因标记和抗性标 记作为示踪手段，将GFP标记的CHWl0B菌株接种到南方红豆杉1年生盆栽实生苗根表面，借助荧光显微镜及稀 释涂布技术，对根际土壤中GFP标记菌株进行定期回收检测。【结果】成功获得CHWIOB菌株荧光表达强烈且稳 定遗传的GFP转化子，该转化子及野生菌株均为革兰氏阴性(G一)，短杆菌，但二者在LB固体平板上的菌落形态 有一定差别。野生菌株菌落呈圆形、边缘整齐，表面湿润黏稠，为乳白色；而标记菌株CHWl0B—GFP2菌落表面为浅 棕色，其他一致；标记菌株溶磷能力与野生菌株接近，发酵液上清液中可溶性磷含量分别为639．12和656．57mg· L～。GFP标记菌株在南方红豆杉根际的数量变化幅度较大，接种I天根际土壤中CHWl0B转化子菌数为 7 6．08×10 cfu·g～，随后细菌数量迅速减少，15天后标记细菌数量开始增多，25～40天菌体数量升高并呈平稳趋 势。用荧光显微镜对接种40天后南方红豆杉的根部进行观察，发现在根系表面及其内部有大量发绿色荧光的 GFP标记细胞存在。【结论】GFP基因标记的CHWl0B菌株在南方红豆杉幼苗根际土壤中具有持久性定殖的能 力；另外，该标记菌株能在根表面和内部定殖，具有内生性。 关键词： 南方红豆杉；草木樨中华根瘤菌；定殖；绿色荧光蛋白基因 中图分类号：：Q939．99 文献标识码：A 文章编号：1001—7488(2015)01—0074—06 melilotiCHWl0B Its Sinorbobium Strain and Colonization GFP-Labelling AssociatedwithTaxuschinensisvar．mairei Ren LiuHui2 NanlWei Jiahon91 Jiang Yuhon91ZhangBin91WangYin91 Scienceand 04601 (1．DepartmentofBiological Technology，ChangzhiCollegeChangzhi1； Scienceand Normal Wuhu 2．CollegeofEnvironmentalEngineering，AnhuiUniversity241003) Abstract： chin