蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B催化活性区原核表达及活性分析.pdfVIP

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2015-08-27 发布于安徽
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蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B催化活性区原核表达及活性分析.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, April 25; 24(4): 553-557 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 PTP1B 1 1 3 2 3 王生育 , 颜江华 , 潘阳霖 , 李学军 , 陈忠 1 , 361005 2 , 361001 3 , 361005 : 从GenBank 获得人PTP1B 催化活性区(PTP1Bc)氨基酸序列(1~301aa), 通过重叠PCR 获得PTP1Bc 基因。构建 pET-22b(+)/PTP1Bc 原核表达载体, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 阳性重组子IPTG 诱导表达, Ni 柱纯化蛋白。目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白30% 以上。纯化后, 蛋白纯度达95% 以上。Western blotting 结果表明所得的蛋白可与抗 PTP1B 抗体发生特异性结合; 酶活实验证实复性的蛋白具有一定的磷酸酶活性。PTP1Bc 基因的构建、表达纯化及活性分析, 为进一步的功能研究奠定了基础。 : PTP1Bc , 基因表达, 蛋白纯化, 活性分析 Expression and Activity Analysis of Catalytic Domain of PTP1B 1 1 3 2 3 Shengyu Wang , Jianghua Yan , Yanglin Pan , Xuejun Li , and Zhong Chen 1 Cancer Research Center of Medical College, Xiamen University, Xiamen 361005, China 2 The First Hospital of Xiamen, Xiamen 361001, China 3 Research Center of Biomedical Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, China Abstract: The amino acid sequence (1−301aa) coding the human PTP1B catalytic domain (PTP1Bc) was obtained from the GenBank. The PTP1Bc gene was constructed by overlapping PCR, then was inserted into vector pET-22b(+) and expressed efficiently in E. coli BL21(DE3) under optimum condition after IPTG induction. The proteins were expressed mainly as inclusion bodies with the yield of more t