鳜传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白基因原核表达.pdfVIP

维普资讯 第 19卷 2期 中 圈 病 毒 学 19 (2)： 137— 140 2004年 4月 VIROLOGICA SINICA April 2004 鳜传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋 白基因的原核表达 张 敏 ，2 白俊杰 ，劳海华 ，叶 星 ， 简 清 ，罗建仁 (1．中国水产科学研究院珠江水，研究所，广东J州 510380；2 湛汀海洋大学水产学院，广东湛江 524025) ExpressionofMajorCapsidProteinGeneofInfectiousSpleenandKidney NecrosisVirusofSinipercachuatsiinProkaryote ZHANGM in ·! ． BAIJun-jie$$，LAOHai—hua，YEXing，JIANQing，LUOJian—ren r』．PearlRiverFisheriesResarchInstitute，ChineseAcademyofFisher3~Sciences，Guangzhou510380，China2 ZhanjiangOceanUniversiO,Zhanjiang524025，China) Abstract：A pairofprimerswasdesignedaccordingtothesequenceofISKNV mcp gene，andaDNA fragmentabout1400bpwasamplifiedbyPCR usingthedesignedprimers．Theamplifiedproductwas cloned intothepGEM—T EasyVector．Aminoacidhydrophilicanalysisindicatedthattheamino acids residuebetween150and250containedahighhydrophilicregion，whichispossiblelyatrans—membrane regionandthemainepitopeofMCR InordertoconstructtheM CPrecombinantexpressionbacteria，the ，”cpgenewasmodifiedbyintroducingEcoR I restrictionendonucleasesitesatboth5’and3’ends andclonedintoE．coliexpressionvectorpBV220．AftertemperatureinductionandSDS—PAGEanalysis， aproteinofabout50kDainmolecularweightwasdetected．Th eproportionofexpressedMCP intotal bacterialproteinwasabout23％．TwoNew Zealandrabbitswereimmunizedbypurifiedrecombinant M CP toproduceanti—seurm．Westernblotting showed therecombinantM cp hadsomeepitopesofthe nativeISKNV MCR Keywords：Infectiousspleenandkidneynecrosisvirus(ISKNV)；Majorcapsidprotein；Prokaryotic expression；W esternblotting 摘要：根据鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(Infectiousspleenandkidneynecrosisvirus，ISKNV)丰要衣壳蚩 白 (Major Capsidprotein，M