微载体灌注培养制备Vero细胞狂犬病疫苗.pdfVIP

维普资讯 第 l9卷4期 中 国病 毒 学 l9(4)：373．375 2004年8月 VIRoLOGICA SINICA August2004 微载体灌注培养制备Vero细胞狂犬病疫苗 乐 威 2，叶林柏 ，张 捷 1,2刘 静 (1．武汉大学生命科学院病毒研究所，湖北武汉，430072；2．武汉生物制品研究所，湖北武汉，430060) PreparationofRabiesVaccinebyPerfusionCultureofVeroCells onM icrocarriers YUEWei1,2 YELin—bai”，ZHANGJie1,2 LIUJing 9 (1．Instituteofvirology,WuhanUniversity,Wuhan430072，China；2．WuhanInstituteofBiologicalProducts,Wuhan430060,China) Abstract：Toestablishatechniqueforpreparingrabiesvaccinebyperfusioncultureonmicrocarriersin bioreactor,a5 litrebioreactorwasfilledwith l99 cellculturemedium which contains lOg／L of microcarriers．Tl1enVerocellswereinoculatedwithafinalcelldensityofl×l0 ／mL．After7daysof culture．celldensitycanreach6～7×10~／mL，thenrabiesvirusVaG strainwasinoculatedwiht aMOIof O．01．After24hinoculation．hteculturedviruseswereharvestedcontinuouslyofr12days．Thetiterof collectedviursinhteculturemedium wasabout6．0to8．5logLDso／mL．From htesecollectde viurses． vaccineswerepreparde throughhtestepsofconcentration，inactivationnadpurification，Tl1equalityof thesevaccinesmeets ‘1‘’}leChineseRequirementsofrBiologicsYera 2Oo0”．Thislab—scalemehtodofr preparingrabiesvaccinebyperfusioncultureonmicrocarriesisviable． KeYwords：Bioreactor；Perfusionculutre；RabiesVaccine 摘要：本文研究在生物反应器中用微载体连续灌注培养Vero细胞生产狂犬病毒制备技术。在5L体积的生物反应 器中，加入含 10gni 微载体的 199培养基，接种 Vero细胞至细胞浓度达到 1xlOS／mL，培养 7d后细胞可生长至 6-7x106／mL，然后以感染复数 (MOI)为0．01接种狂犬病毒VaG株，接毒后24h开始收获，连续收获 12d左右， 收获的病毒滴度范围在 6．0—8．5logLDs0／mL，收获的病毒原液经浓缩、灭活和纯化等步骤制备成疫苗，各项质量 指标均达到 《中国生物制品规程》2000年版要求。实验表明，用生物反应器微载体灌注培养制备人用Veto细胞 狂犬病疫苗小试工艺可行。 关键词：反应器；灌注培养；狂犬病疫苗