实验2纤毛虫的染色方法.pdfVIP

实验 2 纤毛虫的染色 中山大学生命科学学院 白庆笙 2008.3.2 1. 由于计划学时和实验条件所限，本次实验只做碳酸银染色，其它两种染色方法供同 学们了解和比较。 2. 本次实验需用油镜观察，请预习“油镜的使用”。 3. 本次实验作业需要绘图，请仔细阅读实验指南中“生物绘图”一节。 纤毛虫的三种常用染色方法 中山大学 白庆笙 一、 蛋白银染色法 1．染色步骤 1）样品的固定：培养液用Bouin’s 液固定 15 min 以上。 2 ）离心。4000 r/min 离心 1 min。样品离心，蒸馏水洗3 次。 3 ）涂片。在载玻片上，加 1 小滴蛋白甘油和 1 滴上述洗净后的样品，取解剖针混匀展 平，放在清洁通风处，阴干 12-24 h。 4 ）95% 酒精水溶液 20 －30 min 。 5 ）75% 酒精水溶液 3 －5 min 。 6 ）水洗3 次，每次 2 min 。 7 ）新配制的0.2 % KMnO 水溶液中氧化。1 min后取出第 1 片，快速水洗 1 次；之后每 4 隔 10 s取出一片载玻片，使各片之间有氧化程度上的梯度。 8 ）2.5 %草酸水溶液 3 －5 min 。 中山大学 白庆笙 9 ）蒸馏水洗3 次，每次 3 －5 min 。 10）0.4 %蛋白银水溶液中，于 56－60 ℃水浴 15－25 min 。 11）显影：显微镜下显影至虫体核与纤毛（鞭毛）显现即止，快速水洗 1 次。 12) 定影 2 min ，快速水洗一次。 13）脱水，透明：70 %酒精水溶液—95 %酒精水溶液—100 %酒精水溶液—100 %酒精 水溶液—二甲苯—二甲苯，各 10 min。 14）中性树胶封片（通风操作），保存。 2 ．药品的配制 1）Bouin’s 固定液：1 份冰醋酸（CH COOH ）,1 份甲醛溶液（HCHO ）,15 份饱和苦味 3 酸 [(NO ) C H OH] 。 2 3 6 2 1 2 ）蛋白甘油： ① 取新鲜鸡蛋 1 枚，将分离得到的蛋白置于 250 mL 的锥形瓶中。 ② 充分抽打蛋白液 5 min，静置一段时间（约 10 min 左右）后，将泡沫下面的蛋清 液小心倒入另一同样规格的锥形瓶中（应缓慢进行以防将上面的泡沫也随之带 入）。 ③ 重复操作步骤②5 次。 ④ 将等量的甘油与之混匀，并加少量的麝香草酚以防腐。在 4 ℃冰箱中可长期保存。 3 ）显影液：以5 ％的亚硫酸钠（Na SO ）水溶液配成 1 ％浓度的对苯二酚（C H O ）。 2 3 6 6 2 4 ）定影液：2.5 ％的硫代硫酸钠（Na S O ·5H O ）水溶液。 2 2 3 2 二、硝酸银染色法 中山大学 白庆笙 1． 染色步骤 1）置微量的蛋白水于载玻片上。 （如淡水及土壤中生活的小型皮膜较厚的种类如盾纤目种类、肾形虫类等可省略此 步，直接由下一步开始） 2 ）以微吸管将虫体连同与上述蛋白水同量的培养液一起滴在蛋白水滴上，以解剖针搅 匀后吸除多余水分。 3 ）在空气中干燥（切勿干燥）；接近干涸时可用手在玻片上方扇动以加速干燥并阻止 虫体变形溃破。 4 ）加 1 滴硝酸银覆盖于虫体上，在台灯（45 －60 W 白炽灯泡）下相距2 －3 cm 曝照 15－30 min （如用紫外灯则可近至1－2 cm ），视需要可补加一些硝酸银以防干燥。 5 ）以蒸馏水冲洗3 －5 min，倾去多余水