鹿瓜多肽关节腔注射干预兔膝关节软骨退变的实验的研究.pdfVIP

中文摘要 目的：探讨鹿瓜多肽关节腔注射对兔膝关节骨关节炎模型软骨退变的 保护机制，为临床应用鹿瓜多肽防治骨关节炎提供实验依据。 方法：将50只新西兰大白兔随机取40只采用单侧后肢管型石膏伸直 位制动法造模，其余的10只不造模，作为正常组。造模成功后将OA模 型兔等分为4组，分别为模型组、HA组、鹿瓜多肽I组、鹿瓜多肽II组。 各组分别给予对应的药物关节腔内注射治疗。药物治疗5周后，用空气栓 塞法处死动物。再分别用组织学、RT-PCR和生物化学等技术对兔KOA 模型关节软骨、关节液和关节滑膜等部位进行检测和评估。本课题分四个 实验进行： (1) 切开实验侧兔膝关节，用肉眼观察兔股骨关节面大体结构的病 理变化；切取适量关节软骨制作成普通光学显微镜切片和透射电子显微镜 切片，观察关节软骨超微病理变化。并按照Mankin关节软骨组织学评分 系统对光镜下软骨组织的病理变化进行半定量评分，并比较各组间的差 异； (2) 在切开膝关节之前抽取关节液，检测关节液中NO、IL．113的含 量；观察比较各组关节滑膜的炎症表现及程度； (3) 取兔关节软骨，用RT-PCR技术检测药物干预治疗对兔KOA动 物模型中关节软骨MMP．3，MMP．13，TIMP．1mRNA表达的影响； (4) 切取适量的兔股骨髁负重关节面软骨组织，用免疫组化法分别 测量GAG含量和II型胶原阳性染色面积，并比较各组间的差异； 结果： (1) 肉眼观，HA组、鹿瓜多肽I组，这二组关节软骨的病理变化 肉眼观基本相同，表面大多呈黄色，斑片状或广泛性略显粗糙，未见明显 裂纹或缺损，鹿瓜多肽II组关节软骨呈浅黄色，表面较光滑；光镜、电镜 观察发现，药物治疗后鹿瓜多肽II组动物关节软骨细胞的形态、结构、排 列等均优于HA组、鹿瓜多肽I组。 (2) 治疗前各组NO、IL．1B含量无明显差异，治疗后鹿瓜多肽I组 肽II组关节液中NO、IL．1p含量与其他组相比明显降低，有显著性差异 (P0．05)。关节滑膜及滑液病理对比观察结果表明，HA组、鹿瓜多肽 I组、鹿瓜多肽Ⅱ组这三组关节腔中滑液无明显增多，滑膜无或有轻度充 血、．肿胀、增生，滑膜炎症较模型组明显减轻。 (3) 的mRNA表达明显增高，而TIMP．1表达明显降低。正常组与模型组比 较，差异有显著性意义。各治疗组表达值比模型组显著降低(P0．05)。 各治疗组间比较，鹿瓜多肽I组与HA组无显著性差异(P0．05)，但鹿 瓜多肽II组与HA组、鹿瓜多肽I组有显著性差异(P0．05)。 (4) 各组GAG含量统计结果：①模型组与HA组比较，软骨基质中 型组分别比较，鹿瓜多肽组软骨基质中GAG含量有显著性差异，P0．01； ③鹿瓜多肽I组、II组间比较，软骨基质中GAG含量有显著性差异， P0．01；II型胶原阳性染色面积统计结果：①模型组与HA组比较，阳性 染色面积比无显著性差异，P0．05；②鹿瓜多肽I组、II组与HA组、模 型组分布比较，鹿瓜多肽组阳性染色面积有显著性差异，P0．01；③鹿瓜 多肽I组、II组间比较，阳性染色面积有显著性差异，P0．01。 结论： (1) 鹿瓜多肽注射液可以明显减少KOA动物模型关节液中NO、 IL．1D含量，并能够抑制滑膜炎症； (2) 鹿瓜多肽关节腔注射治疗KOA动物模型，能抑制M2MP$表达， 增加TIMP．1表达，抑制关节软骨胶原的降解，从而延缓关节软骨退变； (3) 鹿瓜多肽关节腔注射治疗KOA动物模型，不仅能提高ECM中 GAG含量，促进II型胶原的合成，且效果与剂量有一定关系。 (4) 鹿瓜多肽可促进KOA动物模型关节软骨细胞外基质合成，并 对新合成的基质降解有显著抑制作用 ．· 通过对关节软骨肉眼大体观察、光镜下的组织病理学观察，以及电镜 的超微结构变化的研究，结果表明：在上述各种因素的共同作用下，鹿瓜 多肽能够促进II型胶原合成、提高GAG含量，抑制ECM降解，减轻或 控制KOA炎症反应，从而维护和保持关节软骨正常的结构和功能，延缓 兔KOA模型关节软骨退行性病变的进程。 关键词骨关节炎鹿瓜多肽注射液组织学N0细胞因子II型胶原 III i I