人小肠三叶因子在糙皮侧耳中的整合表达及检测.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 ’( )!! 0’ ) 年 月 #$$! %$ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,’-./ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人小肠三叶因子在糙皮侧耳中的整合、表达及检测 徐晓晶 张 竞 李 曦 俞梅敏 茹炳根 （北京大学生命科学学院蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室 北京 %$$25%） 摘 要：用原生质体法将含双 启动子及人小肠三叶因子（ ） 的表达载体导入糙皮侧耳（ GH4IJ FK1L +M0I !#$%’$( (’%#)’$( ）中，原生质体转化子在含有除草剂的培养基上初步筛选，获得抗性菌株。通过NOP 分析证明FK1L +M0I 已 整合到侧耳基因组中。以 为抗原免疫家兔制备了抗血清，纯化后的 以直接型酶联免疫吸附检测（ ） FK1L KQR 6SKHI 方法测定效价，并建立起 的竞争型酶联免疫吸附检测（ ）方法，给出了标准工作曲线，以应用于大规模表 FK1L 6SKHI 达菌株的筛选确立。检测表明， 在侧耳新鲜菌丝体中分 个表达量段： 、 、最高达 FK1L G %$$$ T %#$?QU Q %!2$ T %5$$?QU Q #$$$ T ##$?QU Q，约占总可溶性蛋白的$ V5 W T %V W 。X.Y,./? 印迹进一步分析证明FK1L 在侧耳中的表达。 关键词：人小肠三叶因子（ ），糙皮侧耳，竞争型 FK1L 6SKHI 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Z@!G I $$$%43#$@ #$$! $4$3$@4$! 人小肠三叶因子（ ， 蔬 号”糙皮侧耳（ ）购于中国农业 [:78? 9?,.Y,9?8( ,/.\’9(\8+,’/ %$ !#$%’$( (’%#)’$( FK1L）是一种特异分布于胃肠道粘膜表面的小分子 科学院。 量蛋白质。属于新发现的三叶因子蛋白家族，含有 主要试剂：各种限制性内切酶、 连接 ! !# 1! M0I 个半胱氨酸残基。从 端起前 个半胱氨酸残基 5 0 3 酶、 聚合酶等购自 公司， .)/ M0I N/’7.Q8 [C-’?40 形成 对二硫键，交联方式为 ， 和 ，由此使 G %4 #4!