不规则抗体检测操作规程1422.docVIP

红细胞不规则抗体检测操作规程 1．0 目的 规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。 2．0 适用范围 适用于输血科（血库）抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。 3．0 材料 抗球蛋白试剂、筛选细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管。 4．0 设备 普通离心机、血型血清专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。 5．0 抗体筛选操作步骤 5．1 取试管3支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。 5．2 混匀，37℃孵育1h。 5．3 1300g离心15s。 5．4 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。 5．5 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。 5．6 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 5．7 按试剂说明书加最适释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。 5．8 1300g离心15s。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。 6．0 抗体鉴定步骤 6．1 抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验以确定其特异性。 6．2 依据谱细胞数量的多少（一般由8～16个单人份的已知血型表型的O型红细胞组成）取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。 6．3 混匀，37℃孵育1h。 6．4 1300g离心15s。 6．5 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。 6．6 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。 6．7 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。 6．8 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。 6．9 1300g离心15s。轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。 7．0 注意事项　 7．1 按《临床输血技术规范》第十七条要求，必须对交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内接受多次输血者进行抗体筛选试验。 7．2 抗体筛选有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可在配血前 有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者不能及时输血。 7．3 抗体筛选用试剂红细胞必须含有18种抗原，所表达的抗原以纯合子基因所表达的抗原为佳。随机获得的O型红细胞作为试剂细胞难以达到上述要求，易造成抗体漏检。目前已有商品化的试剂细胞供应。 7．4 抗体筛选技术的要求是：①尽可能多的检测出有临床意义的抗体；②尽可能少的检测出无临床意义的抗体；③尽可能快的完成抗体检测。 7．5 抗体筛选试验的方法有：盐水试验法、白蛋白介质法、凝聚胺法、凝胶法、酶试验、抗球蛋白试验等，每种方法虽然都有自己的特点，但仍以抗球蛋白试验为金标准。 7．5．1 盐水试验 盐水试验可用于检测盐水反应性抗体，会漏检IgG性质的抗体。 7．5．2 酶试验（菠萝酶或木瓜酶） 很少用于抗体筛选，因为酶方法会破坏一些红细胞抗原，目前主要用于MNSs系统的抗体鉴定及唯抗体的鉴定。 7．5．3 聚乙二醇-间接抗球蛋白试验（PEG-IAT） 所需时间少，方法灵敏度高，但反应温度为室温，因此无法排除无临床意义抗体的干扰（尤其是室温盐水反应性抗体）。 7．5．4 LISS-间接抗球蛋白试验（LISS-IAT） 此方法可以有效的用于检测不规则抗体（IgG抗体），目前市场上见到的微胶柱方法都是Liss-IAT方法，如达亚美的（DiaMed）usBio）的博唯优（BioVue）以及Immucol的Capture技术均为LISS-IAT的方法。此方法缺点是无法排除无临床意义抗体的干扰。 7．5．5 上述方法中无任何单一的方法能够检测出所有的抗体。在选择方法时必须了解此方法的特异性、灵敏度、局限性、假阳性、和假阴性。影响抗原抗体反应的因素有孵育温度、血清对细胞的比例、反应时间、PH值和离子强度等。 7．6 抗体筛选试验并非能检出所有有临床意义的抗体。原因是：①低频率抗原的抗体可能被忽略；②以往免疫所产生的抗体已降至难以检出的水平。因此以入的抗体鉴定记录有重要参考价值。尽管如此，但国外认为，抗体筛选比交叉配血更可靠、更敏感。 7．7 对于抗球蛋白试验的试剂需要定期做阴性、阳性对照。阴性对照采用AB型血清致敏的洗涤红细胞，阳性对照采用IgG型的抗-D试剂致敏的Rh（D）阳性红细胞。两者都正确反应才表明标本检测结果可靠。　　　　 抗体鉴定 在患者血清不规则抗体筛选为阳性时，且时间允许的情况下，在交叉配血之前，应该进行抗体鉴定试验，确定抗