紫外快速测定法检测维生素C含量.docVIP

成 都 医 学 院 教 案 首 页 2012-2013年第2学期20级预防医学本科专业 任课教师：杨威特 课程 卫生学检测技术 题目 紫外快速测定法检测维生素C含量 学时 讲授 实验 4 练习 行课时间 2013 年6 月12日 第 6 至9节 课次 第9次 教 材 自编教材 教 具 电子课件 教 学 目 的 要 求 掌握紫外法测定维生素C的原理、方法和测定注意事项； 熟悉紫外分光光度计的原理和操作； 了解维生素C相关的一些知识。 教学重点 难点及其 解决方案 重点及难点：紫外分光光度计的原理和操作 解决方案：通过实验让学生了解紫外分光光度计的原理和操作，并能通过制作标准曲线测定维生素C含量 参 考 资 料 人民卫生出版社出版，梁康主编《卫生理化检验技术》 华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编《卫生理化检验与微生物学检验》 实 施 情 况 小 结 教研室主任签名： 2013 年 月 日 成 都 医 学 院 教 案 续 页 教学过程、内容及时间分配 教学方法与手段 紫外快速测定法检测维生素C含量 目的 掌握紫外法测定维生素C的原理、方法和测定注意事项； 熟悉紫外分光光度计的原理和操作； 了解维生素C相关的一些知识。 二、原理 ?维生素C的2，6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C具有对紫外产生吸收，于243nm处测定样品液消光值，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。 三、材料、仪器与试剂 （一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。 ?（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（10ml, 25ml）、移液管（0.5ml，1.0ml）、吸管、研钵。 ?（三）试剂 ????1．10%盐酸：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。 ????2．1%盐酸：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。 ????3．1mol/L氢氧化钠溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。 四、操作步骤 （一）标准曲线的制作 1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100ug/ml。 2. 配置以下不同浓度的坏血酸溶液各10 ml：2ug/ml，4ug/ml，6ug/ml，8ug/ml，10ug/ml。 3．消光值的测定：以蒸馏水为空白样，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（ug）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。 （二）样品的测定 ????1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1%盐酸，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（10min）来消除。 ? 2．样品的测定：取0.1ml提取液，放入盛有0.2-0.4ml 10%盐酸的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。 ????3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.1ml提取液，2ml蒸馏水和0.6-0.8ml 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.6-0.8ml 10%盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其消光值。 ?4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素C的含量。 五、计算 ???????????????????????? ×100×25ml ????Vc的含量（μg/g）= —————— ???????????????????????? ?W总 ????式中：——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg） ????W总——称样重量（g） 讲解法 讲解法 演示法 实践法