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电镜技术在肾活检中的应用 重庆第三军医大学新桥医院肾内科、全军肾脏病中心 重庆市肾脏病研究所 (邮编400037) 袁发焕 一、电镜技术的利·类、特点、及其局限性： 目前，常用的电镜技术主要有以下两大类： 1、透射I乜镜(Trans—electron是目前临床肾活检汞I其他 Microscope)： 生物标本的病理检查使用得最多的一项技术。其基本工作原理与普通光镜相似， 不同的是电镜用电子束代替光镜的光束来作为样品照明的介质，放大倍数大大 提高，理论放大倍数可达30～50万倍，因此，可以观察到光镜所不能观察到的 微细结构及其病变。伴随着高放大特性，电镜还具有观察范围小的局限性。jE 因为此原因，在肾活检和其他组织的病理检查中，电镜只能作为光镜的延伸和 补充，而不能取代光镜，犹如显微镜能使我们看到微观世界，但不能取代人眼 来观察世界。根据标本处理方法不同，透射电镜又可分为：超薄切片负染色透 射也镜技术(看切面超微结构，使用最多，是本文叙述的重点)、冷冻蚀刻透射 II=l镜技术(看断裂面超微结构，使用较少)、酶细胞化学染色透射电镜技术(观 察特定的酶)、免疫细胞化学染色透射电镜技术(观察特定的抗原)。 2、扫描电镜(Scan—electron 扫描电镜的：[作原理与解剖 Microscope)： 显微镜类似，是通过观察物体表面对电子束的反射，来观察物体的表面结构。 目前，在肾脏病领域，扫描电镜主要用于科研，在肾活检标本的临床病理诊断 一p的应用，有待于开发。 二、电镜技术在肾活检中应用的意义： 透射电镜下可看到光镜下所不能看到的超微结构，如各种亚细胞器、病毒颗 粒、纤维、电子致密物等，电镜技术在肾活检应用中的意义可分为以下3种情 况： 1、在肾活检的临床病理诊断中起决定性作用。譬如微小病变性肾病、薄基 底膜肾病、早期膜性肾病、早期淀粉样变性、Alport综合征、纤维样肾小球病、 免疫触须样肾小球病、胶原III肾小球病、Fabry氏病等，l|fii床病理诊断主要依 靠电镜下的有关资料。 2、在肾活检的临床病理诊断中起参考作用。电镜下所观察到的病变对一些 疾病的分型、分期、活动度判断、病因的鉴别等，具有重要的参考意义。 3、在肾活检的l|台i床病理诊断中仅起辅助作Jl_Ij，f【l镜观察所发现的病变对根 据光镜和免疫荧光所得出的诊断不能提供重要的修正意见。如IgA肾炎、系膜 增生性肾炎等。 三、电镜技术应用于肾活检时常见技术问题和预防措施： 1、取材无肾小球，电镜无法提供肾小球的有关信息。这利t情况在肾活检标 本的电镜检查时经常发生。发生这种情况的原因有两个，其一，也镜所能观察 的范围有限；其二，肾小球在肾组织中呈非均匀分布。预防这利t情况发生的措 施有两条：首先要把好取材关，分别在肾组织条的两端各取lmm长的组织块， 两块组织均包埋固定，这样总有一块是肾皮质，含有肾小球。其次，就是坚持 超薄切片前常规进行光镜定位，选有肾小球的部位进行超游切片。 2、组织取材、固定、切片过程中的技术性损伤，导致观察、鉴别困难。常 见原因羽I预防措施包括：①组织块过大，固定液渗透时间过长，组织中心部位固 定差，超薄切片时组织易碎，对于穿刺针取得的肾组织条而言，其粗细是合适 的，只需确保切取组织条长度不超过lmm即可预防组织块过大的问题；②取组织 块的刀片不利，来回拖拉损伤组织，预防的方法是用新刀片，在预先滴有固定 液的腊板上一刀切断；⑦环境温度过高，组织在环境中放置时问过长，导致组织 损伤，预防的办法是固定液置4℃预冷，在肾活检现场立即切取组织块后迅速置 预冷的固定液中固定；④固定液种类、浓度、pH和固定时间不适当造成组织固 定不良或过度，均影响切片质量和电镜观察，以我们的经验，对于肾活检标本， 以戊二醛一锇酸双重固定效果较好，戊二醛浓度以2％较适宜，不宜过高，戊二醛 以0．1mmol／I。的磷酸缓冲液配置后置4a保存，保存时间不宜超过2周，久置后 plI回会降低，其颜色变黄则不能使用，戊二醛固定应在4C进行，最好24小时 后即进行锇酸后固定，如条件不允许，戊二醛固定时间不宜超过72小时，否则 组织会变脆，很难切成完搀的切片，影响观察：⑤超薄切片时刀痕