北美型猪蓝耳病病毒鉴别RTPCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

36 中国动物检疫 2011 年第28 卷第12 期 北美型猪蓝耳病病毒鉴别 RT-PCR 检测方法的建立及应用 张燕霞，吴发兴，郑 辉，刘　爽，张　志，李晓成 （中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　266032 ） 　　摘　要 ：参考Genbank 发表的美洲型猪蓝耳病病毒（porcine reproductive and respiratory syndrone virus ， PRRSV ）CH-1a （北 美型经典PRRSV ）、JXA1 （北美型HP-PRRSV ）等毒株的的主要结构蛋白基因序列，应用Primer5.0 软件设计了一对特异性的北 美型PRRSV 鉴别检测引物，其对经典PRRSV 的扩增片段为511 bp，对HP-PRRSV 的扩增目片段为421 bp 。进行了该方法的特异 性、敏感性、重复性试验，建立了美洲型PRRSV 鉴别RT-PCR 检测方法。应用此法对2010 年 1—12 月收集的126 份临床样品进行 了检测，总体检出率达53.17 ﹪。结果表明该方法具有特异、敏感、重复性好等优点，可用于北美型PRRSV 的临床发病鉴别检测及 流行病学监测等工作。 　　关键词 ：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ；北美型；Nsp2 基因 ；RT-PCR ；鉴别 　　中图分类号 ：S852.659.6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005-944X （2011 ）12-0036-03 Establishment and Application of Identifi able RT-PCR Method for North American Type PRRSV Strains Zhang Yanxia ，Wu Faxing ，Zheng Hui ，Liu Shuang ，Zhang Zhi ，Li Xiaocheng （China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao Shandong，266032 ） Abstract ：According to the Nsp2 genomic sequence of CH-1a ，JXA1 and the other American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV ） published in GenBank ，a pair of specific and identifiable primer were designed using the Primer5.0 software ，the motive segment of amplifi cation is 511bp for classical PRRSV and 421bp for HP-PRRSV. An identifi able RT- PCR method was established and its specifi city ，sensibility and reproducibility were tested.The method was used to detect 126 clinic samples of PRRS collected from January to December 2010，the positive rate was 53.17% ，including 2 classical PRRSV and 65 HP- PRRSV. The results showed that this method was specific ，sensitive，repeatable and could be used to detect and epidemiological surveillance of American-genotype PRRSV. Keywords ：Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ；North American gen