三类骨髓基质细胞条件培养液体外扩增巨核系细胞.pdf

生理学报 Acta Physiologica Sinica, April 25, 2005, 57 (2): 247-253 247 研究论文 三类骨髓基质细胞条件培养液体外扩增巨核系细胞 1 1,2,* 黄艳红 , 王绮如 1 2 中南大学 湘雅医学院血液生理研究室; 生殖与干细胞工程研究所, 长沙 410078 摘 要：为了研究骨髓成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞条件培养液对巨核细胞的体外扩增作用，本文通过分离纯化骨髓 成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞，收集无血清骨髓成纤维细胞条件培养液(fibroblast conditioned medium, F-CM) 、骨髓 内皮细胞条件培养液(endothelial cell conditioned medium, E-CM)和骨髓巨噬细胞条件培养液(macrophage conditioned medium, M- CM) ，分别离心、超滤，获得原液、分子量(MW)10 kDa 组分及MW10 kDa 组分。将三种无血清条件培养液及其 10 kDa 组分和10 kDa 组分, 分别加入巨核细胞体外液体培养体系，观察成熟巨核细胞的生成。结果表明：F-CM 和E-CM 及其10 kDa 组分加入培养体系后，成熟巨核细胞的生成显著增多，分别为对照组的(287.33 ±16.77)%、(141.21 ±17.47)%、 (236.67 ±39.72)% 和(179.03 ±30.98)% ； F-CM 的作用明显大于E-CM (P0.001); F-CM 和E-CM 的10 kDa 组分、M-CM 及其10 kDa 组分和10 kDa 组分加入培养体系后成熟巨核细胞数无明显改变。分别将F-CM 、E-CM 、M-CM 加入巨核 细胞液体扩增体系，24 h 后取细胞作巨核细胞集落形成单位(colony forming unit-megakaryocyte, CFU-Meg) 的测定。结果表 明: F-CM 和E-CM 对CFU-Meg 生成均有促进作用，M-CM 对CFU-Meg 生成无明显影响，扩增强度分别为扩增前的(168.18 ±30.24)% 、(215.17 ±17.4)% 和(85.0 ±7.0)% 。逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR) 实验结果表明：骨髓成纤维细胞表达促血小板生成素(thrombopoietin, TPO) ，不表达转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1); 骨髓内皮细胞表达TGF-β1，不表达TPO 。上述结果提示：F-CM 、E-CM 及其10 kDa 组分 均对巨核系成熟细胞及巨核系祖细胞体外扩增有促进作用；F-CM 对巨核系成熟细胞体外扩增的促进作用强于E-CM 。 关键词：骨髓；基质细胞；条件培养液；巨核细胞；扩增 中图分类号：Q462; R331.2 Stimulation of bone marrow stromal cells conditioned medium on the expansion of mature megakaryocytes and colony forming unit-megakaryocyte in vitro 1 1,2,* HUANG Yan-Hong , WANG Qi-Ru 1Research Laboratory of Blood Physiology, Xiang Ya Medical School; 2Reproduction and Stem Cell Engineering Institute, Central South University, Changsha 410078, China Abstract: In this study the effects of bone marrow stromal cells conditioned medium on the exp