pdftgfβ1对奶牛乳腺上皮细胞增殖凋亡及hsp70蛋白表达的影响.pdf

中国农业科学 2008,41(10):3249-3255 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.10.043 TGF-β 对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及 1 HSP70蛋白表达的影响 狄和双，杜 娟，张中霞，黄静燕，崔群维，程凯宁，王根林 （南京农业大学动物科技学院，南京 210095 ） 摘要： 【目的】探讨TGF-β对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70 蛋白表达的影响。【方法】TGF-β 作 1 1 用乳腺上皮细胞不同时间，收集细胞及培养液，应用 MTT 检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检 测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt 技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10 ng·ml-1 -1 的TGF-β 均能抑制乳腺上皮细胞的增殖，且随浓度增加抑制作用加大，呈现剂量依赖性，其中10 ng·ml TGF- 1 β -1 组与对照组差异显著（P ＜0.05）；10 ng·ml TGF-β 作用于乳腺上皮细胞, 随着作用时间的延长，细胞凋亡率 1 1 逐渐升高，其中6、12和24 h与对照组相比差异极显著（P ＜0.01）；LDH活力随作用时间延长而升高，12、24 h 与对照组差异极显著（P ＜0.01）；DNA完整性随 TGF-β 作用时间的延长发生不同程度降解；TGF-β 作用2～6 h 1 1 细胞大量表达HSP70，6 h达到高峰，而后下降，2～12 h的表达量均极显著高于对照组（P ＜0.01）。【结论】TGF- β -1 可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖，具有浓度依赖性。10 ng·ml TGF-β 可以显著增加细胞凋亡率，提高细胞 1 1 培养液中LDH 活力，使细胞DNA发生不同程度的降解，同时HSP70蛋白随TGF-β1 作用时间发生显著的表达变化。 本试验结果表明，TGF-β1 可以以促进上皮细胞凋亡的方式，促进奶牛乳腺发生退化。 关键词：TGF-β1；乳腺上皮细胞；细胞凋亡；HSP70 Effects of TGF-β on Proliferation, Apoptosis and HSP70 Expression