AdsTNFRIIgGFc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, May 25; 24(5): 774-779 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 Ad-sTNFRI-IgGFc 腺病毒载体的构建及其转染人气道 平滑肌细胞 1 1 1 2 2 2 2 2 苏瑾 , 尤长宣 , 蔡绍曦 , 马骊 , 王小宁 , 温茜 , 罗微 , 黄泳塔 1 南方医科大学南方医院呼吸科, 广州 510515 2 南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所, 广州 510515 摘 要: TNF-α是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子, 参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子活性, 已被用来治疗与TNF 相关的炎性疾病。将 sTNFRI-IgGFc 基因插入腺病毒穿梭质 粒pDC316, 与辅助质粒pBHGlox ΔE1, 3Cre 共转染HEK293 细胞, 重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc, PCR 鉴定毒种正确后, 进行扩增、纯化和滴度测定, 转染人气道平滑肌细胞, 利用RT-PCR 、免疫组化方法, 流式细胞仪, ELISA 检测转染后细 胞中 sTNFRI-IgGFc 的转录和表达。实验结果证明成功构建了 Ad-sTNFRI-IgGFc 腺病毒载体, 感染性滴度达 3 ×1010 TCID50/mL, 200 moi 转染气道平滑肌细胞阳性率达 99.32%, 转染后气道平滑肌细胞在 mRNA 和蛋白水平均有 sTNFRI-IgGFc 表达。转染上清稀释 64 倍后仍对 TNF 有拮抗活性。为将表达 sTNFRI-IgGFc 腺病毒基因治疗哮喘的实 验研究提供了基础。 关键词: 可溶性肿瘤坏死因子受体, 腺病毒载体, 人气道平滑肌细胞, 支气管哮喘 Construction of Adenoviral Vector Encoding Soluble Human sTNFRI-IgGFc cDNA and Its Expression in Human Airway Smooth Muscle Cells (HASMCs) Jin Su, Changxuan You, Shaoxi Cai, Li Ma, Xiaoning Wang, Qian Wen, Wei Luo, and Yongta Huang 1 Department of Respiratory Diseases, Nanfang hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China 2 Institute of Molecular Immunology, School of Biotechnology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Tumour necrosis factor (TNF