高效液相色谱手性试剂衍生化法及其应用.pdfVIP

文献综述 高效液相色谱手性试剂衍生化法及其应用 曾 苏 （浙江医科大学药物分析教研室 杭州 310031） 应有相同的衍生化速率。另外，从对映体杂质的最小 1前言 检出量考虑，杂质峰最好在主峰之前洗脱，通过换用 随着手性药理学的兴起，色谱法分离手性对映 两种不同构型的手性试剂可容易地达到这一目的。 （2）手性试剂和反应产物在衍生化反应和色谱 体也就成为生物医药分析最有意义的领域之一，同 时也是色谱学研究最重要的分支— 手性色谱 条件下应是稳定的。为了防止消旋化，反应条件应尽 学（1～3）。对对映体分析产生巨大兴趣的原因有：（1） 可能温和简便。为了保证分析方法的准确性，衍生化 许多药物对映体不仅药理作用不同，而且生物转化 反应需定量完成（90～100％ィ）。 过程亦有差异（4）。例如临床广泛使用的β阻滞剂如 （3）衍生化反应生成的非对映体对在色谱分离 时应能显示高柱效。这在生物药物分析中尤为重要， 普萘洛尔，其S-对映体生物效价是R-对映体的 因痕量的非对映体衍生物需要在大量内源性化合物 100倍，而R型代谢速率则比S型快。为了探讨对映 体生物效应的体内差异，就需要建立生物样品中拆 存在下测定。为达到高柱效，应选择最佳色谱条件， 分和测定对映体的分析方法；（2）有一些药物以纯对 如RP或NP、流动相组成、添加剂、pH和柱温等。 映体供药用，对其光学纯度的质量控制，手性色谱法 （4）手性试剂应具有UV或荧光等敏感结构。尽 比经典的旋光法提供更为可靠的数据（5,6）；（3）不对 管手性衍生化的目的是将对映体转变成能良好分离 的非对映体对衍生物，但是真正优良的试剂同时还 称合成的发展也促进建立手性色谱法用于测定合成 的起始物质、中间体和最终产物。 应使生成物具有良好的可检测性。例如具有萘结构 目前手性色谱法中，应用最广泛的当属高效液 的手性试剂与胺类反应，最低UV检测限约10ng， 相色谱法（HPLC），其分离对映体的方法有三种（7） 若衍生物具有荧光，检测限则可达1ng以下。这在对 手性固定相法（CSP），手性流动相添加剂法 映体浓度低的生物药物分析和相对纯的对映体中痕 （CMPA）和手性衍生化试剂法（CDR）。第三种方法 量光学杂质的测定时显得特别重要。 费用较少，易于在基层单位使用，因此本文仅就 （5）手性化合物对映体的化学结构中应具有易 于衍生化的基团，如氨基、羧基、羟基和巯基等。 CDR法及其应用作一简要介绍。 2手性衍生化试剂的反应条件 3手性试剂的种类和应用 为了有效地分离和准确地测定对映体，CDR及 酰化试剂（10～12）酰化试剂是由羧酸衍生的，一般 其衍生化反应需要满足以下条件（3,7～9） 手性碳原子位于羧基的a位，主要用于分离胺和醇 （1）手性试剂和反应产物在化学上和手性上都 类。主要应用形式有：酰氯、酸酐、酯。其中酰氯的反 很稳定。手性试剂应是光学纯且在贮存中不发生改 应性最强，即使是仲胺、仲羟基也能反应，但性质欠 变。在衍生化反应中，试剂、手性药物和反应产物不 稳定，如市售的N-三氟乙酰-S-脯氨酰氯，在存放 应发生消旋化反应。若有光学纯对映体，试剂中对映