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⾸⻚ | 技术⽀持 | ⽣⼯官⺴ ⼀抗 ⼆抗 标签抗体 内参 蛋⽩多肽 ⽀持试剂 We Focus On Antibody! Keyword/Antigen Host Reactivity Conjugate Search Catalog 免疫组化 （Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry,ICC）实验流程 ⼀抗 ⼀、原理 ⼆抗 内参 免疫组化是应⽤免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显⾊剂 （荧光素、酶、⾦属离 标签抗体 蛋⽩多肽 ⼦、同位素） 显⾊来确定组织细胞内抗原 （多肽和蛋⽩质），对其进⾏定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术 （Immunohistochem- ⽀持试剂 istry）或免疫细胞化学技术 （Immunocytochemistry）。 ⼆、仪器设备 不锈钢⾼压锅、电炉或微波炉 三、常⽤试剂 1. ⼆甲苯 （2-3个⽉更换） 2. 100%⼄醇，95%⼄醇，85%⼄醇，75%⼄醇 3. 灭活酶试剂：3% H O -甲醇 （1 ml 30% H O 加⼊9 ml甲醇） 2 2 2 2 4. PBST洗涤液：500 mL 10×PBS+4495 mL ddH O+5 mL Tween-20 ，混匀，PH 7.2-7.4 2 5. ⼀抗稀释液 （封闭液）：3% BSA-PBST 溶液 （0.03 g BSA溶于1ml PBST ） 6. 1% 盐酸-⼄醇：1 ml 盐酸溶于99 ml⼄醇中 四、操作步骤 （⼀）⽯蜡切⽚免疫组化步骤： 1. 组织固定：将切⽚置于60°C恒温箱中烘烤60分钟。 2. 脱蜡：将切⽚⽤⼆甲苯浸泡10分钟，更换⼆甲苯后再浸泡10分钟。 3. ⽔化：分别⽤⽆⽔⼄醇浸泡5分钟；95%⼄醇中浸泡5分钟；85%⼄醇中浸泡5分钟；75%⼄醇中浸泡5分钟。 4. 洗涤：ddH2O浸泡5分钟，清洗3次。 5. 抗原修复： （免疫组化⽯蜡切⽚） 经福尔⻢林等固定的组织有可能破坏了原来组织的抗原结构，蛋⽩多肽发⽣交联，导致部分抗原表位封闭，结合位点减少，所以需要 抗原修复，以暴露原来的抗原表位，达到充分显露抗原，以不出现明显脱⽚现象为佳。 抗原修复的⼏种常⽤⽅法 （仅供参考） （1）.微波炉加热 在微波炉⾥加热0.01M枸橼酸钠缓冲液 （pH6.0）⾄沸腾后将组织芯⽚放⼊，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。根据玻⽚情况可参考 采⽤微波加热“3-5-3法” ，3分钟温⽕沸腾后静⽌5分钟，再温⽕沸腾3分钟即可。 （2）. 沸热修复 电炉或⽔浴