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2015-07-31 发布于安徽
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868 Journal of Chinese Physician ,July ,2004 ,Vol 6 ,No7 VEGF165在哺乳动物细胞中的稳定表达 1 2 2 2 2 1 1 1 唐浩 ,陈勇 ,夏昆 ,文娟 ,卿志荣 ,赵天力 ,杨进福 ,胡冬煦 ( 1 中南大学湘雅二医院胸心外科 ,湖南　长沙　410011 ;2 医学遗传学国家重点实验室) 【摘要】　目的　探讨 pcDNA31 - VEGF 质粒对哺乳动物细胞的表达和转染。方法　将 pcDNA31 - VEGF 质粒用电转的方 165 165 法导入 CHO 细胞中 ,G418 筛选细胞克隆。通过 RT - PCR 、ELISA 、Westen - blot 在转录水平和蛋白质水平上检测 VEGF165 在转基因 CHO 细胞中的表达。通过内皮细胞增殖实验和血管通透性实验检测所表达的 VEGF165 的生物学活性。结果　获得有 G418 抗性的 CHO 细胞克隆。RT - PCR 扩增出一条大小约 600bp 的特异性泳带 ,测序结果与 VEGF165 mRNA 一致。ELISA 显示细胞培养上清的 VEGF 浓度约为 10～20ng/ ml 。WESTEN - BLOT 检测到大小为 23KD 的特异性蛋白质条带。内皮细胞增殖实验显示细胞培养上清具有促内皮细胞增殖作用。血管通透性实验显示细胞培养上清明显增加毛细血管通透性。结论　pcDNA31 - VEGF 质粒真核表达 165 系统能在哺乳动物细胞中表达具有良好生物学活性的 VEGF165蛋白。 [ 关键词] 　　VEGF165 ;CHO 细胞 ;转基因 ;基因表达 The stable Expression of VEGF in Mammalian Cells 165 TAN Hao , CHEN Yong , XIA Kun , et al . Department of Cardiothoracic Surgery , The Second Xiangya Hospital , Central South University , Chang sha 410011 , China 【Abstract 】　Objective 　To investigate the transfection and expression of pcDNA31 - VEGF plasmid in mammalian cells. Methods 　pcD 165 NA31 - VEGF plasmid was transfected into CHO cells by