PR反向膜杂交技术检测乙型肝炎病毒C.pdfVIP

重荔Gtd．z．h~MedicalJournal，2000，Vo1．丝 No．2 69 · 6卜 PCR反向膜杂交技术检测乙型肝炎病毒 遵义医学院附院检验中|( ) 肖 瑜 彭理 椿 光 罔晓兰 、 ‘ 摘 要 目的探讨PCR反向膜杂交技术在乙型肝更病毒(HBVDNA)~ 中的应用。方法 用 吼 反向膜杂交技术定r陆检测 100倒血清标本 中的HBVDNA，结果与常规 PCR法和酶联免疫吸附测 定(ELISA)方法比较。结果 100倒血清标本，本法阳性率为53．0％，常规PCR法为47．0％ HBsAg(+) 和H瞻Ag(+)与HBVDNA有很好的相关性。结论 访技术能快速 、敏感和高度特异地时PCR产物进 行鍪定，亦可检测 HBV的真实感染和夏制情况，有助于乙型肝炎的临床诊断。 关键词 乙型肝炎病毒 度向膜杂交 聚合酶健反应 — r — — — — 、 、 一 De oilhq眦 瞻 Bvinlsby腿 erem-Iflothybrkg~ ．methodXa／o ， L／n／an， Q删 ，d ．The Hosp／za／z 州 Med／ca／Co2／ege，563003 A岫 _d Obje~veToevaluatethevalue0fde~--tingtheHBVDNAwitI|PCR-leversecr0＆hl0thrbndiza- donassay．M 哪 1008elMm san~plesfromhepatitisB b pcR- ㈣ cv0ss-hlothyhid- izalion．ResultsThehepefitisBvirusDNApositivel-atewas53％ theassay．h1IiDil~nPCR 47％ ．Be n theHBAg(+)with珈 ^g(+)，HBVDNAwereclose∞md丑ti帅．CotlelusbmPCR-ieversccross-blothyhidi~s。 tion nrapid，senmtive，specificmethodtOdetectPCR 加 ，andtOhelptheclinicaldiagnosas0fher~itis B K野 wlads H印 豳 Bvirus Re．~ersec船 bIDthytaldlzat／on PCR PCR是检测血清中HBV的敏感而特异的方法。 1．2．1 原理 采用碱性变性法对可疑标本进行裂 但是，常规PCR法存在某些不足之处 ：(1)应用凝胶 解、释放并提取其中DNA。利用针对乙型肝炎病毒 电泳检测易引起 PCR扩增产物交叉污染而导致假 基因组的特异性引物，对HBVDNA进行扩增。扩增 阳性。(2)所采用的染色剂溴化乙啶具有强致癌作 产物用生物素(Biotin)标记，与固定在纸条上的特异 用，可能危害操作人员及污染环境。(3)电泳法只能 性探针进行反向杂交；探针捕获的 Biotin和碱性磷 判定产物的长度而不能区分其特异性。近年发展起 酸酶标记的链霉亲合素(SA)特异结台后，酶催化底 来的PCR反向膜杂交技术、微孔板杂交技术、荧光 物显色，在齿条上显出蓝色斑点。试剂盒中使用 定量技术成功地将 PCR技术 、核酸杂交技术及酶联 dUIP和UDG酶，能够有效消除污染的扩增产物对 免疫技术结合起来，克服传统 PCR方法中的不足． 检测结果的干扰。 能快速、敏感 和高度 特异地对 PCR产物进行鉴 ’1．2．2 仪器 美国产 PE24O0型基因扩增仪 定…。本文用PcR反向膜法检测 100份临床血清标 1．2．3 PCR杂交试剂盒．由上海复星实业股份有限 本中的HBVDNA，同时采用常规 PCR法和 ELISA法 公司提供 。 进行对照