细胞工程考试..docVIP

1.体外细胞培养物的生长类型 按生长方式:2型 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长 2,根据形态大致的不同，主要2类： 上皮细胞型 1)生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状，生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动 成纤维细胞型 2) 生长特点，排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起 3悬浮生长型 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源：自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞癌肿细胞也可能 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)，易于收获，可获得稳定状态 缺点：观察不方便，很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 培养细胞的生长特点：（生长机制） ：（一）贴附（二）接触抑制（三）密度抑制 4: 原代培养(Primary Culture)期 也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。 特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。 5： 传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系（Cell Line）。 特点：在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型 6: 天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限。 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。 易发生支原体污染 （1） 血清质量好坏是实验成败的关键。 常用血清有胎牛血洁、新生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。 血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃ ，30 分钟 血清的消毒：过滤除菌 7: 添加小牛血清的作用 ⑴提供生长因子和激素 ⑵提供贴附因子和伸展因子 ⑶提供结合蛋白 ⑷提供必需脂肪酸和微量元素 8: 细胞融合:指两个或两个以上的相同或不同的细胞合并形成一个细胞的过程。 细胞融合过程可分成两个阶段 ①异核体阶段(heterokaryon)：异核体是指在融合细胞内含有来自两个亲本的细胞核。异核体中细胞核尚未融合， ②杂种细胞形成：当异核体同步进入有丝分裂后，核膜崩溃，来自两个细胞核的染色体结合在一起。融合细胞内只含有一个细胞核，是由来自两个亲本细胞的基因组组合在一起所形成的。此时的细胞就称为杂种细胞。 9: PEG 的作用 1、PEG可能使细胞膜（尤其是有丝分裂的骨髓瘤细胞）的脂类分子的物理结构发生重排，容易被PEG作用打开细胞膜，使细胞融合。 2、PEG可能会把细胞膜上的蛋白质分子排开，使脂质体扦入与膜结合。 3、PEG可能作用于膜磷脂极性基团和细胞膜表面蛋白。使膜磷脂的表面电位下降，同时使膜糖蛋白的排阻体积减少，最终使膜出现缺口，进而融合。 10” 显著污染的标志：培养基pH值的迅速改变、细胞外形模糊、甚至出现漂浮的集落。 污染通常表明操作者技术的失误或设备及用具上出了毛病。 组织出现污染，可加青霉素200U/mL、链霉素200U/mL、和制霉素100U/mL。卡那霉素（100U/mL）是支原体药物，可抑制其感染，单不能根除。 11: 细胞融合过程可分为： 1 凝集：细胞凝集与细胞膜的糖蛋白有关 2 蛋白质分子重新分布：是细胞融合的必要前提 3 脂质分子重排：是实现细胞融合的关键 4 胞质合并：后续的稳定步骤。 12: 冻存条件不当造成对细胞的破坏的原因？ 低温—细胞内形成冰晶—细胞内电解质浓度升高—细胞脱水—细胞失活 13: 饲养细胞(Feed Cell，Fc)： 在细胞培养中，单个或少数分散的细胞多半不易成活，通常必须加入适量的其他活细胞才能使之繁殖，这种被加入的活细胞，被称作饲养细胞。 14” 饲养细胞的作用 ①提高培养细胞的密度，使待克隆细胞容易生存与繁殖。 ②腹腔细胞能清除培养中的死亡细胞，从而促进单个细胞克隆的生长。 ③饲养细胞能释放诸如细胞生长因子类物质，起到促进细胞分裂、增殖的作用。 15; 1．选择骨髓瘤细胞理想的杂交瘤细