催乳素受体基因(PRLR)与羊驼繁殖性能关系的初探.pdfVIP

催乳素受体(Pmlactkn 看，催乳素受体包括三部分，即膜外结构域、跨膜结构域和膜内结构域唧，PRL受体结构的多样性主要 基因定位于第2号染色体上，小鼠的PRLR基因定位于15号染色体上。 此外，国内外对猪产仔数性状的主基因和标记已有大量研究，并证实催乳素受体(PRLR)基因与猪 产仔数相关。Van 著影响初情期年龄、受精年龄和体重(P0．05)。但目前有关羊驼的PRLR基因序列对羊驼繁殖性能 PRLR基因的研究积累一点分子水平的资料。也为深入研究PRLR基因对羊驼繁殖性能的影响奠定一定 的基础。 1材料和方法 1．1村料与试剂 实验所用的血样和组织均采自山西省榆次市“中华羊驼养殖基地”。DNA提取与PCR 扩增所用试剂：Tds饱和酚、蛋白酶K(ProteinascK)，Rnase、‰DNA polymerase、dNTP easyvector、IPTG、x-gal、EcoRl购自上海生工生物工程技术服务有限公司。 1．2方法 羊驼血液基因组DNA的提取均采用酚／氯仿抽提法m“l。 1．3羊驼PRLR基因exon8～exon9的PCR扩增 1．3．1 PCR引物的设计与配制 序列进行同源比较，根据保守区序列利用美国Primer3．0网站在线设计引物，序列如下： Sense primer：5-CAACCGTGTGGATCTTTGTG-3 Anti-Sense primer：5-CCAAGCAGATGAGTATCAAATCC-3 PCR引物由北京赛百胜公司合成。 1．3．2 PCR反应体系优化结果与扩增程序 扩增时，依次对退火温度、镁离子浓度、引物进行筛选，最终确定PCR体系的优化组合。 PCR反应体系t 72℃，10rain． 1．4羊驼PRLR基因克隆与测序 连接，连接反应条件为：4C过夜。连接产物转化E．coil 和20mg／mL 挑单菌落穿刺到15ul含Amp的LB固体培养基上，送北京农科院测序。 2结果与分析 2．基因组DNA的提取 用1％的琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的质量，结果见图l。 图1．羊驼基因蛆DNA GenomicDNAfromtheblood Fig．1 ofalpacas 2．2 PCR扩增结果 8和部分exon9，由 图2可见。 图2革驼PRLR基因PCR扩增结果 2 PCR ofPRLRin Fig producergermalpacas 2．3引物P1扩增片段的测序结果 序列。 测序结果(图3)中，阴影部分为PCR扩增时的I-_下蝣引物，有下划线的是外显子部分，没有下 划线的是内含子部分，方框圈住的是内含子的5。端和3’端。 AA AAAATGATGG CCAATCATGGTTC汀CAGGCATAATGGCTAAAACATAATACA ACTG AACAGTAAAACTCTGGCA AAAAGGAlrTGATACTCATCTGCTGG 图3羊驼PRLR基因POR测序结果 The ofPRLRin Fig．3 scqugncc genealpacas 2．4测序结果与GeneBank中其它动物PRLR基因的同源比较 究对羊驼exon8和exon9编码区DNA序列与以上动物相应区段进行了比较，结果见表l。 表1． 羊驼PRLR