简易细胞钓蛋白带技术的建立及应用.pdfVIP

维普资讯 ( ／ 四川解剖学杂志 】90R年第4卷第4期 {II才 I‘ ，，＼＼ 鲁{II -I} 简易细胞钓蛋 白带技术 的建立及应用 燃 L 王廷华 吴 良芳 廖德阳 李秀琼 成都 610041 摘要 本文用聚丙烯酰胺凝胶电泳代替特别 TBS)，浓缩胶浓度 5％(缓冲液为 pH6．7的 装置 PhastSystem 电泳建立 了简易的细胞钓蛋 白 TBS)，电极缓冲液为 pH8．3的Tris一甘氨酸 带技术，并用该技术初步寻找去部份背根猫手术侧 液 。每个样品槽点样 60l(样 品液为去部份 背角提取液中的活性蛋白质。结果显示 ：电泳恒定出 背根猫脊髓手术侧提取液)，稳流 30mA进 现的蛋白带有 8条 ．背根节神经细胞密聚附着于其 行 电泳 。电泳后切取一条凝胶放入含双抗的 中的两条蛋白带 提示钓出的该两带中含有维持神 HankS液平衡 lh左右 。其余凝胶经三氯 乙 经元存活的神经营养活性物质。说明我们建立的简 酸 固定 l5分钟 ．0．125％考 马斯亮兰 R250 易细胞钓蛋白带技术可行。 染色 哇h后漂洗至背景无色 ，测各蛋 白带 的相 关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 细胞钓蛋白 对迁移率 (Rf)。 带 ＼ 雨 ～ 一 聚丙烯酰胺 凝胶 电泳 (Polyacrylamide 1．2 细胞钓蛋白带技术 gelelectrophoresis，PAGE)对蛋 白质有 良好 将 已备好的鸡胚背根节细胞悬液，倾倒 的分离性能[1q]，它 已成为生 命科学 中蛋 白 于平衡 后的凝 胶 条上 放 入 CO。孵箱 培 养 质分离纯化的有效技术。近年来，通过应用 48h．10％甲醛 固定 20分钟 ，0．125％考马斯 Phastsystem 使蛋 白质 良好分离后于凝胶上 亮兰 R250染色 lh．显徽镜下观察细胞在凝 倾倒神经细胞悬液来寻找促进神经元存活的 胶上F勺存活情况 。 营养因子 已成为研究神经营养因子的有效方 法 ～ 。由于 Phastsystem价格十分 昂贵 ，国 2，结果 内大多数实验室无此设备．为此 ．我们建立 了 2．1 PAGE胶片上经染色后显 出多条蛋 白 简 易的细胞钓蛋 白带技术 (Simpleprotein 带