结核特异性抗体结合肽的筛选研究.pdfVIP

．论著． 结核特异性抗体结合肽的筛选研究 杨焕森胡忠义刘忠华王洁沙巍杨华 【摘要】 目的利用纯化的结核病患者血清IgG从噬茵体展示随机7肽库中筛选结核特异性抗 体结合肽，为下一步开发新的结核病血清学检测试剂提供思路。方法 以纯化后结核病患者血清 IgG作为固相配基，按吸附、洗脱、扩增的生物淘洗(简称淘选)过程对噬菌体展示随机7肽库进行筛 选，并于第2至3轮的筛选中加入纯化后健康人血清IgG进行反筛。经过3轮淘选使噬菌体得到富 集，分别从滴度测定平板上各个方位挑取结核病患者IgG和健康人IgG洗脱单噬菌体各20个进行扩 增纯化，提取单链DNA作为模板进行测序，间接ELISA法检测不同单噬菌体与结核病患者和健康人 IgG的结合情况，鉴定出阳性克隆。取收集的47份结核病患者和37份有卡介苗接种史的健康人血清 标本，采用phage—ELISA法对获得的阳性单噬菌体进行初步验证，并对其中24份筛选用血清标本的 检测结果进行分别统计。结果 通过3轮淘选，能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集。单 噬菌体测序分析共获得12种共同序列。12种序列各取1个克隆扩增后进行间接EHSA检测，结果 表明单噬菌体H12与结核患者IgG具有较高的亲和力(S／N≥2．I)，确定为阳性克隆。间接ELISA检 测发现，单噬菌体H12对47份结核病患者血清标本的检出值(o．105±0。010)明显高于对37份健康 人的检出值(O．070±0．005)，t=2．912，P0．0001。对其中筛选用12份结核病患者和12份健康人 血清标本的检出值分别为0．144±0．016、0．0524-0．004，差异同样具有统计学意义(t=5．69，P 0．0001)。结论利用噬菌体展示随机肽库淘选获得了结核特异性抗体结合肽，显示出与结核病患 者IgG较特异的结合活性，为以多肽为基础探索新的结核病血清学诊断方法提供了依据。 【关键词】分枝杆菌，结核；肽库；免疫测定；C肽 oftuberculosis YANG Screening specificantibodybindingpeptides Huan—sen‘．HUzho吣一啦，LIU BasicMedicine Zhong—hua，WANGk。SHAWei。YANGHW．‘Collegeof and球Science。Soochow University，Suzhou215123，China a以hor：YANGHna，Email：shtblab@163．COITt Corresponding Toscreenthe tuberculosisfrom of 【Abstract】Objeetivespecificantibodybindingpeptides phage— random librarieswith fromtuberculosis displayedphagedisplay(Ph．D．)-7peptide purifiedIgG SeTum，and to for of thebasisthe detectionoftuberculosis．MethodsPurified provide developmentserologicalreagent oftuberculosisserumwasusedaSsolid toscrc圯nthe fromthePh．D．-7 lgG ligand bindingpeptide peptide tothe of and ofhealth library，accordingbiopanningpro