非小细胞肺癌循环核酸地研究进展.pdfVIP

江苏省抗癌协会化疗专业委员会第五届年会论文汇编 tlEd,细胞肺癌循环核酸的研究进展 管晓翔，陈龙邦 (南京军区南京总医院肿瘤科．南京210002) 摘要对于肺癌患者临床前期和无症状期，临床诊断往往缺少最有效的无创性检测方法．NSCLC患者 血循环中核酸含量明显高于正常人．研究证实其来源于肿瘤细胞，并且与原发肿瘤有着结构或功能上的某些一 致性，因此循环核酸对肿瘤的早期发现和早期诊断及治疗都具有重要价值．近年细胞分子生物学技术的发展t 循环核酸的检测成为可能。这方面的研究也成为热点，现综述国内外关于NSCLC的循环核酸研究进展． 肺癌是发达国家主要的致残和致死的原因，在世界其他国家肺癌的发生率也逐步上升。在欧洲每年 有15万人被诊断为肺癌，然而仅lO％一15％的患者能够治愈或获得较长的生存期。当肺癌患者在早期 被诊断并进行手术切除后，60—80％患者可以达到5年的生存率，然而绝大部分肺癌患者在被发现的时候 已经失去了手术机会而且很难治愈。过去的依赖痰脱落细胞和胸片的检查已经不能适应肺癌的早期发 现。因此，寻找一种早期无创的检查方法就显得尤为重要。肿瘤患者血浆循环核酸的发现引起国外学者 得极大兴趣，而国内尚少见相关报道，本文就国内外必威体育精装版研究进展综述如下． 1循环核酸的研究历史及其来源 早在1977年Leon等报道，肿瘤患者血浆中循环DNA浓度高于健康人，而且转移性肿瘤患者含量更 高，甚至每毫升可达到微克量。由于当时技术的限制，肿瘤患者外周血中循环DNA的细胞起源未得到鉴 病患者体内可检测到循环DNA，并应用链稳定性试验鉴定循环DNA，第一次表明循环DNA可能具有肿 瘤DNA的某些特征。循环核酸的来源尚不十分清楚，目前一般认为恶性肿瘤患者的循环核酸则大多数 来源于肿瘤细胞。肿瘤转移过程中，脱落的肿瘤细胞在血液循环中凋亡，或被机体免疫系统识别后消灭， 会有核酸释放人血，而原发灶肿瘤生长代谢过程中也会不断因细胞坏死释放核酸人血，血浆中的DNA与 多肽可形成稳定的复合体，导致血浆DNA或mRNA的浓度升高。该推论已经得到大量的试验支持：在 癌症患者血浆DNA中发现了N—ras等癌基因突变，相同的突变也出现在这些患者的白细胞和骨髓中。该 发现强烈提示肿瘤细胞确实能释放DNA进入外周血循环中。另外1996年两个研究小组同时报道，在肿 瘤患者血浆和血清中存在杂合性缺失(LOH)和微卫星移动等肿瘤相关微卫星改变，并与原发肿瘤中的微 卫星改变一致。这一结果是证明循环核酸是肿瘤细胞来源最有力的证据。 2循环核酸的研究意义 大量的实验证实循环核酸与肿瘤核酸某些特异变化的一致性，临床研究也显示循环核酸的检测对于 。肿瘤的早期诊断和微转移检测可能具有重要价值．虽然已有的一些肿瘤血清标志物具有一定的临床应用 价值，但其中可能没有一个比分析衍生于原发性肿瘤的循环DNA更有直接更具价值。基因改变的循环 DNA可能反映肿瘤负荷、转移等，作为一种候选标志物可用于早期发现肿瘤高危患者，甚至用于大批人群 筛选。循环DNA无疑开辟了—个研究新领域，为应用非侵人性肿瘤诊断试验提供了可能性。目前多采 用PCR的方法进行扩增后再进行其他分析，由于PCR具有高度敏感性和特异性，理论上可准确检测19 组织或lml体积中的1个癌细胞或相当于0．04pg水平的循环核酸，被认为是目前早期检测肿瘤基因的最 有效方法．并且，在临床研究中观察到，通过有效治疗，肿瘤负荷减轻后，其循环核酸的值随之下降，对某 些肿瘤的早期诊断、鉴别诊断以及疗效评估和预后判断都显示出极其重要的价值。检测血浆肿瘤细胞 ．2以· 全文刊登 DNA，样本采集容易、操作简单安全、可以同时检测多个基因改变，而且几乎是无创的。 3有关循环核酸的主要研究方法 要进行循环核酸的研究首先必须从血清或血浆中获得循环核酸。循环核酸的提取方法已经成熟，采 DNAmini 核酸抽提试剂盒QIAamp 去离子水．可以存于--20℃备用。5微升约50纳克的DNA足以完成PCR扩增。 尽管存在有试验目的，但是所有的试验均是在纯化得到循环核酸的基础上并进一步进行PCR或(和