MS%2fMS技术和发现中药新成分%60.pdfVIP

MS/MS技术与发现中药新成分 乔善义都继芬 范海涛 高毓涛赵毅民 军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850 摘要 目的:探讨MS/MS技术与经典分离方法相结合，快速发现和分析中药新成分较为理性的思路和方法。 方法:采用植物化学中常用的粗分离方法处理药材，进而以VLC与先进的串联质谱 (MS/MS)技术离线连 接，获得目标成分并进行结构分析。结果:从中药合欢花和绞股蓝中发现了六个极性大的成分，分子量分别 为:386,654.978,1124,992和 1379.在以往文献中，尚无这些成分的报道，可能为新成分.从繁缕中 发现了三个黄酮贰类化合物 (I.111111)，其中III的贰元是芹菜素.分别以碳试键与两个糖连接，一个为 五碳糖，一个为六碳糖，但六碳糖在B环上，五碳糖在A环上.在致缕中，尚无这种黄酮碳试的研究报 道，可能为新成分.结论:将经典的分离纯化技术与先进的串联质谱技术灵活结合，可以较为快速地发现和 分析中药和天然产物中的新成分，为天然活性成分研究提供了一条较为理性的方法和思路. 关健词:串联质谱，合欢皮 绞股蓝.贾缕. 1.前言 化学合成药物难以完全克服的毒副作用使人们对从中药和天然药物中发现活性成分或先 导化合物寄予了厚望。鉴于中药中常见成分已被广泛研究，人们把目光集中到发现新成分 上。以往经典的做法是对中药进行提取，逐个分离纯化其化学成分，然后进行结构研究，确 定是否为新成分。这样的研究模式浪费人力和物力，盲目性很大，经常是在进行了一番工作 后才发现只是分离得到了一些已经被前人研究和发现了的成分.因此，如何有理性地发现中 药中的新成分是国内外化学工作者十分关注的问题。本文将以合欢皮、绞股蓝和繁缕中的极 性成分为对象，探讨如何将经典的分离纯化方法和现代Ms/MS技术结合，较为理性和有针对 性地发现中药或天然产物中的新成分. 绞股蓝[Gynostemmapentaphyllum(Thumb.)Markino]为葫芦科绞股蓝属的多年生攀援 植物，其主要成分为绞股蓝皂贰m。合欢皮为豆科植物合欢A〔lbizzia力librissin.Durazz.] 的干燥树皮，主要含皂贰，糕质，多种木脂素及其糖19Cix-s10繁缕[Stellariamedia(L.) Cyr.]为石竹科植物繁缕的茎、叶，主要含皂贰，黄酮，酚酸，氨基酸等成分s-「e)。其降血脂 活性成分可能为黄酮贰类化合物’，，。选择这三种中药，主要考虑它们的主要活性成分分别为 皂贰、木脂素贰和黄酮贰三类不同的贰类化合物，极性较大，有可能发现新成分。 2 . 材料和方法 曰 植物药材:野生繁缕全草采自贵州省贵阳市清镇，经生药学鉴定为Stellariamedia(L.) C r y ;绞股蓝购于广西崇左县药材公司:合欢皮购于北京同仁堂药店(北京同仁堂饮片厂生 闪 2.2仪器和试剂:API3000串联四极杆型液相色谱/串联质谱联用仪(美国ABI公司);UV- 160A型紫外一可见分光光度计(东京岛津公司).硅胶G薄层层析板及硅胶GF254薄层层析板 (青岛海洋化工厂);聚酸胺薄膜 (浙江台州市路桥四青生化材料厂);AB-8和HP-20大孔 吸附树脂 (天津南开大学化工厂，日本三菱化学株式会社)。 2.3提取与分离:繁缕用95%乙醇提取后，滤渣用水提取，水提物经AB-8大孔吸附树脂柱层 析，35%乙醇洗脱部位用正丁醇萃取得正丁醇萃取部分。正丁醉部分经硅胶真空液相柱层析 (VLC)，得SiFrl-SiFrl8部位.其中SiFr7-SiFrl3释醉胶TLC，刮下主要样品斑点，得化 合物 1、II和III。合欢皮和绞股蓝分别用 80%乙醇提取，提取物经HP-20大孔吸附树脂柱层 折，分别得20%和50%乙醇洗脱物，再分别经硅胶VLC,用氯仿一甲醉一水洗脱系统分二个梯度 洗脱，分别得到67个洗脱部位和 45个洗脱部位。选取部分感兴趣的样品，进行MS/MS分 析，获得其可能的结构信息。 2.4结构分板方法:样品经Q1扫描得到其分子量信息，然后进行子离子扫描得到具有碎片离 子信息的二级质谱，结合文献报道和样品及加入各种诊断试剂的紫外光谱图，分析并获得其 可能的结构或结构信息。 3.结果与讨论 3.1繁缕 化合物I:其紫外光谱及加入诊断试剂后的分析结果表明，化合物I的贰元为4,5,7一二 羚基黄酮00`oMS/MS分析表明其分子量为594，并且含两个以碳成方式与成元连接的六碳糖 基，初步鉴定该化合物为6,8一二葡萄糖基芹菜素。 化合