实验五土壤中微生物的分离计数.ppt

一、实验目的： 学习微生物稀释平板计数及划线分离技术 二、实验原理: 采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法 在固体培养基上形成单个菌落。 依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。 取一瓶牛肉膏培养基（250ml／瓶）熔化后每组倒4个平皿。（每个人倒1个平皿用于划线分离） 三、实验步骤： （一）土样的采集 采集土样，扒开表土层大约5cm厚，取土样10g左右，装于灭菌后的牛皮袋中，封口带回。 （二）土壤悬液制备 准备1瓶土壤悬液：称10克土壤放入带玻璃珠的90ml瓶装无菌水中，振荡（10min），使土样分散。 （三）倒固体琼脂培养基平板 （四）悬液稀释 无菌操作采用－4，－5，－6 稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每个稀释度2个重复。每人用剩下的1个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离。 90毫升 无菌水 10克 土样 10-3 10-2 10-4 10-5 10-1 (五)平板涂布 简单易行，但易 造成机械损伤 Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod. （六）培养： 将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养(温度37℃) 。 （七）细菌计数结果 稀释度 10-5 10-6 10-7 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数 各浓度平均菌落数 土壤中含细菌数量 四、平皿划线分离法 特点：快速、方便。 分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） 五、试管斜面接种 1.两支试管呈“V”字形 2.拔下试管塞 3.火焰上微烧一周 4.接种环灼烧、冷却 5.接种、划线 6.塞上塞子，灼烧接种环 六、思考题 (1) 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么? (2)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里? * 用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增多而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 * 用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增多而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。