放射免疫实验我.docVIP

放射免疫分析实验 王国庆 实验目的与要求。 1、掌握RIA原理； 2、掌握常规放射免疫分析的操作步骤及注意事项； 3、了解放射免疫分析剂量反应曲线的数学拟合方式及放射免疫分析过程影响质量的因素。 二、实验原理。 放射免疫测定技术是用竞争性结合的原理，利用放射性同位素标记抗（Ag*）和非标记抗原（Ag）对特异性抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定抗原-抗体结合物的放射活性来判断非标记抗原的量。 在上述反应系统中，作为试剂的标记抗原和抗体的量是固定的。抗体的量一般取用能结合40％～50％的标记抗原，而受检标本中的非标记抗原是变化的。根据标本中抗原量的不同，得到不同的反应结果。 1968年Miles和Hales建立了利用核素标记的抗体检测抗原的放射分析法，为了与放射免疫分析区别，故称免疫放射分析技术(immunoradiometric assay，IRMA)。 由于它应用核素标记抗体作为示踪剂，在反应体系中加入过量的抗体，待测抗原(或标准品)与和核素标记抗体进行全量反应，故亦称非竞争性免疫分析法。 二、材料与用具。 125I碘-T4放射免疫测定药盒、125I-T4（红色），6瓶，20ml、抗T4血清（羊抗-T4抗体，蓝色）,加10ml蒸馏水溶解、T4标准品：6瓶（0、20、40、80、160、320 ng/ml）、驴抗羊免疫分离剂（PR试剂）1瓶，50ml、质控血清、样品血清、蒸馏水、试管（13×78 mm）若干只、微量加样20μl、200μl、1000μl 各1支、塑料吸头若干、水浴箱、离心机各1台、γ放免测量仪1套。 试验方法。 1、加样：保证加样量尽量一致。每人独立做6-7管（6-7个重复样品）。 2、混匀。保证轻轻混匀。 3、离心20分钟。 4、吸上清。 5、测定。 6、计算机处理：由电脑自动处理得出结果。建议函数模型采用三次多项式或log～logit法/四参数拟合绘制标准曲线。 7、共同做一个标准曲线。 8、独立处理自己的数据。 四、实验结果。 1、实验中作的标准曲线如下： 2、试验中样品测定结果如下： 表一：样品测定值表 编号 管架号 CPM值 B/BO 浓度值 7 8 9 10 11 12 3-7 3-8 3-9 3-10 3-11 3-12 13252 13245 13465 13640 13922 17385 0.63 0.63 0.64 0.65 0.67 0.86 1.74 1.74 1.69 1.64 1.57 0.74