晚期糖基化交联产物裂解剂酶联免疫吸附测定筛选方法的建立.pdfVIP

中国药理学与毒理学杂志 年 月； （）： ２００４ ６ １８３ ２２８－２３２ · · ； （）： ２２８ ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ ２００４ Ｊｕｎ １８３ ２２８－２３２ 晚期糖基化交联产物裂解剂酶联免疫吸附测定筛选方法的建立  王莉莉 ，刘洪英，王汝欢，崔 浩，李 松 （军事医学科学院毒物药物研究所，北京 １００８５０） 摘要：目的 建立一种快速、体外筛选晚期糖基化 葡萄糖或其他还原糖分子上的羰基与蛋白质分 终产物（ ）交联结构裂解剂的方法。方法 以牛 子上游离氨基结合形成可逆的加合物，这些加合物 ＡＧＥ 血清白蛋白（ ）与葡萄糖孵育形成 ，并 经分子重排形成一类不可逆产物称晚期糖基化终产 ＢＳＡ ＡＧＥＢＳＡ 与包被于 孔酶标板上的大鼠尾胶原蛋白交联制 物（ ， ）。结合于大 ９６ ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔＡＧＥ 备 胶原交联结构，药物作用一定时间后， 蛋白分子上的 又可与邻近的氨基共价交联，最 ＡＧＥＢＳＡ ＡＧＥ ［，］ １２ 采用以抗ＢＳＡ为抗体的ＥＬＩＳＡ方法检测 ＢＳＡ残留 终形成ＡＧＥ交联结构 。ＡＧＥ交联结构过度沉积 量，以此评价裂解剂的裂解强度。并对 ＥＬＩＳＡ全程 于血管基质与血管老化及心血管系统组织硬化密切 条件进行了优化。结果 ＢＳＡ与葡萄糖孵育３～４ 相关，是引发心、脑卒中及心、脑、肾等重要生命器官 ［，］ ３４ 个月后，在 （ ）下出现特异性荧光， 功能衰竭的重要原因 。尽管至今对 交联结 Ｅ／Ｅ ３９５／４６０ｎｍ ＡＧＥ ｘ ｍ 电泳显示 的 已转化为分子量大于 构尚不十分清楚，但是新近研究证实，几种由糖蛋白 ＳＤＳ ６８．０ｋｕ ＢＳＡ 蛋白质，表明已形成 ； 可 形成的 均具有蛋白质连接的羰基中间体的特 ６８．０ｋｕ ＡＧＥＢＳＡＡＧＥＢＳＡ ＡＧＥ 与鼠尾胶原蛋白形成特异性的交联结构，最强特异 征， 特殊的光谱和荧光特性与羰基的形成具有 ＡＧＥ ［，，］ 性结合的包被量为每孔 。最理想的封 平行性 １２５；而选择性打开 结构中反应性