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右旋糖酐蔗糖酶工程菌株的构建及其培养条件的研究.pdf
蒸 Research
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Sinica
微生物学报ActaMicrobiologica
2q008
48(4):492.497:4April
ISSN
0001.6209:CNll—1995J/Q
http:,∞oumals.im.ac.cn
右旋糖酐蔗糖酶工程菌株的构建及其培养条件的研究
张洪斌1,一,朱春宝1,胡又佳1,朱宝泉1,王雅洁2
(1上海医药工业研究院,上海200040)(2合肥工业大学制药工程系,合肥230009)
摘要:【目的】右旋糖酐蔗糖酶是一种以蔗糖为底物,催化转移D.葡萄糖基生成01.葡聚糖或低聚糖的葡
萄糖基转移酶。【方法】利用PCR扩增技术,将已获得的右旋糖酐蔗糖酶基因dexYG亚克隆到表达
载体PET28a(+)上。转化E.coliBL21(DE3),.经过卡那霉素抗性筛选和酶切验证后,得到右旋糖酐蔗
糖酶工程菌株BL21(DE3)/pET28..dexYG。【结果】经IPTG诱导该基因在E.coliBL21(DE3)中能有
效表达,在诱导过程中菌体生长受到抑制。通过对培养时间、IPTG浓度、培养温度、菌浓(DD。。。)和
大,在pH6.0时的最高产酶活力是LB原始pH条件下最高酶活的3.5倍,并且pH值也是导致在诱导
后期酶活迅速下降的主要原因之一。【结论】酶的表达和酶活的研究结果表明,构建的工程菌株能
够异源高效表达右旋糖酐蔗糖酶,并且表现出较高的酶活力。
关键词:右旋糖酐蔗糖酶;工程菌;表达;培养条件
文献标识码:A 文章编号:0001—6209(2008)04-.0492.06
中图分类号:Q786,Q935
右旋糖酐蔗糖酶(Dextransucrase,EC2.4.5.1)是一高浓度蔗糖为培养碳源经肠膜状明串珠菌(L.mes.
种由肠膜状明串珠菌(Leuconstocmesenteriodes)和口
腔链球菌(oral 难分离,致使右旋糖酐质量低,临床副反应多。另一
strepotococcus)产生的葡萄糖基转移酶
产品低聚糖是通过0c(1—2)键联结而耐消化酶,可通过
(glucosyltransferases)…。该酶以蔗糖为底物,将蔗糖
分子中D.葡萄糖基催化转移到受体分子。其结果可 胃、小肠消化道到达大肠内,而且这种支链低聚糖能
以生成两种不同的产品【241;①合成0c.葡聚糖;②若在被双歧杆菌和乳酸菌利用而不被沙门氏菌和大肠杆
酶反应中加入受体如麦芽糖、异麦芽糖等可合成低聚 菌所利用,有利于大肠内有益微生物的调整,被称为
0’11
糖:同时伴有果糖产生【5】。 益生元[1 J。另外,右旋糖酐蔗糖酶也可以直接加入
0c.葡聚糖,又名右旋糖酐(dextran),是若干葡萄发酵食品中改善产品质构。因此,获取高活性的右旋
糖脱水形成的聚合物,主要由葡萄糖0【.1,6苷键连接 糖酐蔗糖酶对于实现上述诸多应用、提高产品品质具
而成【6】。因其具有安全、无毒、生物相容性好等多种 有重要意义。但肠膜状明串珠菌在产右旋糖酐蔗糖酶
优点,已被广泛应用于医药、食品、色谱分析等多个 的过程中,由于其碳源与酶底物均为蔗糖,产生了高
领域【5’7】。分子量70000左右的右旋糖酐是目前公认粘度的右旋糖酐,难以分离获得右旋糖酐蔗糖酶。因
的优良血浆代用品之一,有增加血容量作用【8】,临床 此,构建右旋糖酐蔗糖酶基因工程菌株以获得新的
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