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·228· 《中兽丢学杂志)2008牟增翻 PCR扩增动力学的有关因素。每一次循环的PCR产物均是下一次循环的底物,模板的扩增呈 指数式。随着循环次数的增加,酶淫性下降、溶液中反应物的消耗增加,扩增不蒜呈指数式进 行,导致扩增产物的累积处于平台期。在平台期低水平表达的RNA可能会增加到与高水平表 达的RNA裰阕的浓度。因此定量时要保证循环次数在搔数期蠹,才能保证咒嚣产物与模板量 呈线性关系[4l。本试验通过不同循环数的PCR扩增,选择处于指数期内的25个循环为本试 验检溅L—meq时的扩增循环数,保证了PCR产物与模板量线性关系及结采的准确性。本试验 所用的内参照B—actin属于保守性强的“管家基因”,在生物体内普遍存在,受到外来刺激时, 其在各组织/细胞中能稳定表达,设立内参照可减少因RNA定量时产生的误差[5]。 3。2人参总皂菅对L—meq基因mRNA水平的影响 meq基因是马立克氏病病毒致瘤相关基因之一,其N一端碱性亮氨酸拉链结构域与Jun/ Fos家族具有阏源性,恧C一端富含黯氨酸结擒域弱聊··l蒡孛瘤捧裁蛋自耱钕,戴结构域与酵 蛋自能有效防丘由Ot一稍F、N一乙酰鞘氟醇、紫外照射和盘清饥饿诱导的Rat一2细胞的死亡, 其过量表达能弓l起鼠成纤维细胞系Rat一2的转化,转化能力通过抑制细胞凋亡得到扩展,细胞 内bcl一2的转录诱导和bax的表达受到抑制。另据报道,菌源性Meq磺自能够与p53碳端四 聚体的结构域粳结合,可能通过于扰tb53与DNA的结合来促进缨胞的增殖[1】。 的细胞相比反式激活作用降低,表明L—Meq蛋白可能是一种转录抑制子。在有meq的细胞内 受到抑制。因此,在共转染细胞L—Meq蛋白能够抑制表达meq基因的wMDVl的复制[7】。 上述资料表明,L—Meq蛋白可能通过抑制Meq蛋囱的功能而起到转录抑制的作用。 本试验应用半定量RT—PCR方法,比较了不同浓度人参总皂静对MSB—l细腿乙一meq基 基因的含量,间接抑制meq基因的功能,诱导细胞发生凋亡,从而抑制MSB—l细胞的增殖,其 具体祝镯有待子进一步探讨。 参考文裁:《略) 当归对鸡骨髓造盘机能的影响 侯海锋1。李茜2,史万玉¨ (1.河北农业大学动物科技学院,河北保定071001; 2.河北省富牧兽医研究所,河北保志071000) 摘要:骨髓是出生后的盘要造血器官,用体外细胞培养方法观察中药对骨髓造血祖细胞 集落的生长情况影响,较直接地反姨了中药改善案髓造血功能在于能促进造血祖细胞漕殖。本 实验采用骨髓造血狙细胞体外半固体培养技术,观察当归煎刿和含药血清对红系(CFU—E)、 瀑系(BFU—E)和粒一巨系(C阿一Grd)造血椒细胞集落增殖的作用。结果表明:含药血清组能 血勰纽胞砖增殖作髑可能是通过促进造血霞子戆变税来麓接促进造血租细胞鹩增殖实现锈。 关键词:当归:鸡;造血祖细胞 当归具有补血灞血,调经止痛,润燥滑肠等功效,为临床使用频率较离的中药,索有“十方九 归”之称,当归对机体的免疫系统、造血系统均有明显的作用。本实验对鸡的CFU—E,BFU—E 程CFU—GM的体外培养进行了探索,并观察了不网浓度的当归熬剂,以及不同浓度的含药斑 清对集落增殖的影响,为深入研究鸡骨髓造血祖细胞的功能变化及血液病的发病机理提供可靠 方法纛必要熬理论基础,同时为中医替盎药的猛床癍角和孛医李}盘理论提供了新的有价值的实 验依据。 《中兽医学杂志)2008年增刊 ·229· l材料与方法 1,l试验动物 试验用雏鸡为购自保定市鹿园种鸡场的10日龄健康海兰灰强公鸡80只。 1.2试验材料 试验雳姿归,败窦溽北安营孛药材批发市场,经鉴定为正瑟瑟备用。 1640:GIBCO;肝襄钠:天津市生物化学制药厂;淋融细胞分离液:中国鼷学科学院生物工程 物工程有限公司;甲基纤维素:Sigma;EPO,GM—C孵:齐鲁制药有限公裁;C02培养籍:墨本 SANYO公镶;HDL一越净工乎#台:叠艺京东联飧尔仪器制造有限公溺;XDS—lB型蘅置巍微镜:重 庆光电仪器总公司。 1.3中药的处理 试验用懑舞,龆蒸馏永适量浸泡30min,然惹熬煮2次,每次30rain,合并承蘸液,船热浓缩
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