5-HT2C受体在HPH大鼠主肺动脉中差异表达及其作用研究.pdfVIP

MAPK通路抑制剂在低氧高二氧化碳性肺动脉收缩中的作用：．= 朱阿楠1王万铁1△林丽娜2王方岩1吴成云3金立达2王少军4王青4 温州医学院1病理生理教研室，2附属第一医院麻醉科，3附属第二医院呼吸内科，4机能 实验中心，浙江温州325035 目的：观察肺主动脉环、二级肺动脉环在急性低氧高二氧化碳介质中张力的 肺血管收缩中的作用。方法：制备离体SD大鼠肺主动脉环、二级肺动脉环。分 别观察肺主动脉环、二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳介质中的张力变 化；在急性低氧高二氧化碳条件下用U0126、SB203580分别孵育二级肺动脉， 观察各自对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响。结果：在常氧条件下，肺主动 脉、二级肺动脉张力均无明显变化。急性低氧高二氧化碳条件下二级肺动脉发生 双向性收缩反应，肺主动脉只在低氧高二氧化碳早期出现较明显的收缩峰，后期 速收缩峰、I期舒张均没有明显变化。结论：在离体条件下，急性低氧高二氧化 可使二级肺动脉环发生双向性收缩反应；U0126、SB203580均能减弱二级肺动 脉环急性低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的II期持续收缩反应。这为临床治疗缺 氧和高碳酸血症引起的肺血管收缩及肺动脉高压提供了理论依据。 幸基金项目浙江省科技攻关项目(No．2006C33073) 1 △通讯作者Tel：0577．866898 7；E．mail：WZWWt@tom．com 5-HT2c受体在I-IPH大鼠主肺动脉中的差异表达及其作用研究 张博李志超董明清 第四军医大学基础部病理生理学教研室，西安710032 目的：低氧所致的肺血管收缩和肺血管结构重塑，是低氧性肺动脉高压 (HPH)发生和发展的基础。发生HPH的动物其肺动脉和主动脉对低氧存在反 应差异性，而这种差异性的发生机理至今仍未阐明。研究表明血管活性物质5． 17 羟色胺(5．HT)及其受体对HPH的发生和发展起着重要作用。本研究旨在明确 常氧和低氧时5-HT2cR在大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)和肺动脉平滑肌细胞 PASMCs)中的表达差异，并进一步探讨RNA编辑是否参与调节这种表达差异， 以及HPH发生时5．HT2cR在主动脉和肺动脉对低氧反应差异中的作用。方法：本 研究在建立大鼠HPH以及平滑肌细胞低氧培养模型的基础上，采用免疫组化、 Western 肌组织及细胞中的表达，明确常氧和低氧时5．HT2cR在主动脉和肺动脉中是否 存在表达差异。探讨5．HT2cR在不同血管组织表达差异的机制，即对包含可能 受RNA编辑的位点的5．HT2cR扩增产物进行测序以检测是否发生了RNA编辑。 检测ADARl在低氧时血管平滑肌细胞增殖中的作用。采用蛋白质合成抑制剂亚 胺环己酮(CHX)在不同时间点终止细胞内蛋白质合成，然后流式细胞仪检测 SB206553分别检测该受体在低氧诱导的血管平滑肌细胞增殖和收缩中的作用。 的表达。qRT．PCR结果显示正常大鼠主动脉组织与其肺动脉组织中5-HT2cR 增多，在其肺动脉组织中则减少。培养的血管平滑肌细胞的qRT．PCR检测结果 与血管组织的结果类似。Westernblot实验表明血管组织中5．HT2cR蛋白表达与 mRNA表达不同，正常大鼠主动脉组织中5．HT2cR表达比其肺动脉组织少。而 HPH大鼠主动脉组织5．HT2cR表达明显减少，在其肺动脉组织中却显著增多。 流式细胞术检测血管平滑肌细胞中5．HT2cR蛋白表达与血管组织表达也类似。 5．HT2cR扩增产物测序发现正常和HPH大鼠的主动脉和肺动脉血管平滑肌组织 样本没有RNA编辑位点的改变。qRT-PCR结果显示正常大鼠与HPH大鼠主动 mRNA表达比其主动脉组织及正常大鼠肺动脉中的表达都明显减少。在培养的 转染后的细胞所表达的ADARlmRNA明显减少。常氧时转染过ADARl特异性 18 的ASMCs的增殖比单纯低氧处理明显增强，而PASMCs则没有显著差异。流式 60h明显延长。特异性的siRNA发挥了对5-HT2cRmRNA的沉默作用。转染实 PASMCs增殖，而且能够明显减弱低氧诱导的细胞收缩。SB206553浓度依赖性 地抑制低氧诱导的细胞增殖。给予不同浓度的SB206553后低氧诱导的ASMCs