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减色效应 目录 生物化学减色效应 生物化学减色效应实验 分析化学减色效应 光学减色效应 　　hypochromic effect 编辑本段生物化学减色效应 　　在生物化学中，是指：若变性DNA复性形成双螺旋结构后，其紫外吸收会降低,这种现象叫减色效应。 编辑本段生物化学减色效应实验 　　1　引　言 　　研究了甲基紫与核酸分子相互作用的紫外——可见光谱，在pH7左右，核酸包括小牛胸腺DNA， 热变性DNA，酵母RNA能够与甲基紫相互作用，甲基紫最大吸收峰在579 nm，随着核酸的加入发生明显的减色效应，减色强度随着核酸浓度加大而增强，据此建立测定核酸的新方法，该方法线性范围宽、简便、快速。 　　2　实验部分 　　2.1　主要仪器和试剂　λ-17紫外——可见分光光度计(美国Pekin-Elmer公 司)。核酸溶液：小牛胸腺DNA，酵母RNA(中国科学院上海生物化学研究所)操作液浓度100 mg/L；甲基紫溶液：2×10－4 mol/L水溶液；Tris-HCl缓冲溶液：pH=7.4。试验用水均为二次蒸馏水。 　　2.2　实验方法　在10 mL比色管中加入0.90 mL 2×10－4 mol/L甲基紫，适量核酸溶液和1.5 mL Tris-HCl缓冲溶液，并稀释至刻度，然后以试剂空白作参比，测定579 nm处的吸光度值。 　　3　结果与讨论 　　3.1　紫外——可见光谱　 　　甲基紫的最大吸收峰579 nm，随着核酸的加入产生减色效应，其减色强度与核酸浓度成正比，减色效应最大是小牛胸腺DNA，酵母RNA最小。 　　3.2　最佳酸度的选择　 　　试验了不同介质条件下体系的减色效应影响，以1.5 mL pH 7.4 Tris-HCl缓冲溶液减色效应最强，且比较稳定。 　　3.3　甲基紫浓度的影响　 　　固定核酸浓度，试验了不同浓度甲基紫对体系的影响，实验结果表明2×10－4 mol/L甲基紫0.9 mL时体系减色效应最大，且与核酸浓度具有良好的线性关系。 　　3.4　反应时间的影响　 　　在室温条件下，体系的反应速度很快，5 min之内体系吸光度即可达到最大，并且在30 min之内基本保持稳定。 　　3.5　离子强度的影响　 　　通过加入NaCl溶液来改变体系的离子强度，随着NaCl浓度的加大，可以抑制核酸对甲基紫的减色效应，在配制溶液或缓冲溶液的选择时应避免离子强度过大。 　　3.6　共存物质的干扰　 　　按实验方法在一定量核酸存在下，大多数离子对核酸的测定影响不大，其测定结果的允许误差不超 过±5%时，下列离子及有关物质不干扰测定(括号内的数字是核酸浓度的倍数)，即Ca2＋、Ba2＋、Mg2＋、Zn2＋（＞50)，Mo（Ⅵ）、 W(Ⅵ)、Fe3＋、Ti（Ⅳ）、Cu2＋、Co2＋、Cd2＋（30），Fe2＋、As3＋（30），乌嘌呤(5)，胸腺嘧啶，嘌呤(3)对体系的测定 无影响。唯有蛋白质对测定干扰较严重，测定前应预先除去蛋白质。 　　3.7　线性范围　 　　实验了不同浓度DNA，热变性DNA，RNA线性范围及工作曲线，不同浓度的实验结果表明：对 于小牛胸腺DNA，热变性DNA和酵母DNA的线性范围分别为0～5．0，0～5．0，0～10．0 mg/L。拟合的线性方程分别为A=-0.10C+0.984,A=-0.089C+0.979和A=-0.039C+0.978(A为吸光度，C为浓 度)其相关系数分别为0.998，0.997和0.995。可见本方法的优点是线性范围宽，药品廉价易得，简便、快速，有一定实用性。 　　3.8　样品分析 　　采用本方法对含有20～30倍Fe3＋，Cu2＋、Ca2＋和Zn2＋的合成样品中 DNA，RNA进行了分析。对标准含量为1.50和2.00 mg/L的DNA，6次测定结果分别为1.52和2.08 mg/L，相对标准偏差分别为3.1%和2.5%；对标准含量为4.00和5.00 mg/L的RNA，6次测定结果分别为3.92和4.91 mg/L，相对标准偏差为1.7%和2.8%。 编辑本段分析化学减色效应 　　在分析化学中，是指：化合物结构改变或其他原因，使吸收强度减弱的效应，也称为淡色效应。 　　在分子光谱中有机化合物的特定发色团吸收峰摩尔吸光系数降低；而且其吸收峰位置产生向蓝位移现 象，称为减色效应。它是由于化合物分子结构发生变化产生向蓝基团所引起的这种现象。如在相等物质的量的核苷酸溶液中，游离核苷酸在260nm处的吸光率较 单链DNA高，而单链DNA的吸光率又比双链DNA高的现象。这是由于多核苷酸链结构中碱基自由旋转受阻所致。通过在波长260nm处记录溶液的光密度， 能够追踪DNA的变性作用。 编辑本段光学减色效应 　　光的减色效应是指从白光或复合光中减去某种色光，而得到另一种色光的效应。 　　光的减色效