一种高灵敏度测定血红蛋白的荧光分析法.pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 1期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 1月 Ch inese Journal of A nalytical Chem istry 54 ～56 一种高灵敏度测定血红蛋白的荧光分析法 李晓燕 　张元勤 　刘志昌　刘 　凡 (乐山师范学院环境与生命科学系 , 乐山 6 14004) ( ) 摘 　要 　建立了以双水杨醛邻苯二亚胺为酶催化氧化底物 ,血红蛋白 Hb 作为过氧化物模拟酶 ,在 Tween 80 介质中的酶催化反应测定血红蛋白的方法 ,并探讨了反应机理 。讨论了利用本体系测定 Hb 的最佳条件 ,结 果表明:在优化的条件下 , Hb浓度在 5. 0 ×10 - 10 ～5. 0 ×10 - 8 mo l/L 范围内呈良好的线性关系 ,方法的检出限 为 2. 6 ×10 - 11 mo l/L 。本方法与其它测定 Hb方法相比具有更高的灵敏度 。 关键词 　血红蛋白,双水杨醛邻苯二亚胺 ,模拟酶 ,荧光分析法 1　引　　言 血红蛋白是生物界分布最广的一种蛋白质 。血红蛋白在人及各种生物体的代谢中起着关键作用 。由 于血红蛋白的结构与辣根过氧化物酶相似 ,近年来引起分析化学家的极大兴趣 [ 1～4 ] 。本实验以血红蛋白 作为过氧化物模拟酶 ,席夫碱双水杨醛邻苯二亚胺为酶催化氧化底物 ,建立了高灵敏度测定血红蛋白的荧 光分析方法 ,并讨论了胶束体系中血红蛋白对 H O 氧化双水杨醛邻苯二亚胺的酶催化反应机理 。 2 2 2　实验部分 2. 1　仪器和试剂 ( ) ( ) RF530 1荧光光度计 日本 Sh im adzu 仪器公司 ; PH S3C 数字型精密酸度计 上海雷磁仪器厂 ; ( ) ( ) - 5 FC204 电子分析天平 上海天平仪器厂 。血红蛋白 hemoglob in , Hb 储备液 : 1. 0 ×10 mo l/L ;按文 ( ) - 4 献 [ 5 ]制备双水杨醛邻苯二亚胺 SALOPH EN 试剂并配制成 9. 5 ×10 mo l/L 的乙醇溶液 ; H O 水溶 2 2 ( ) - 2 液 使用前配制 : 7. 8 ×10 mo l/L ; Tween80水溶液 : 1% ; pH 7. 0 的 KH2 PO4 N aOH 缓冲溶液 。其余试 剂均为分析纯 ,实验用水为二次蒸馏水 。 2. 2　实验方法 在 10 mL 具塞比色管中依次加