4种金丝桃属植物基因组DNA提取及RAPD分析.pdfVIP

第26 卷第4 期 山西大同大学学报( 自然科学版) Vol.26.No.4 2010 年8 月 Journal of Shanxi Datong University(Natural Science) Aug.20 10 文章编号: 1674－0874 （2010）04－0064－04 4 种金丝桃属植物基因组DNA 提取及RAPD 分析 1 1 2 周 凤 ，张东旭 ，吕洪飞 (1. 山西大同大学农学与生命科学学院，山西大同 037009; 2. 浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华 321004) 摘 要: 目的探究金丝桃属基因组DNA 的提取方法及用RAPD 分析的技术体系. 方法 采用改良的低pH 值高 盐法获得高质量的金丝桃属植物总DNA，从80 个10-mer 随机引物中筛选出12 个，对4 种金丝桃属植物的基因组 DNA 进行RAPD 分析. 结果 共产生了330 条DNA 片段，其中218 条谱带具有遗传多态性，约占66.1%. 结论 RAPD 分析揭示4 种金丝桃属植物之间的DNA 指纹存在明显的种间差异，能为金丝桃属植物的分类鉴定提供遗传 学依据. 关键词: 金丝桃属 DNA 提取 RAPD 分析 中图分类号: Q943 文献标识码: A 金丝桃属(Hypericum L. )隶属藤黄科，全世界 用于DNA 提取的叶片采自浙江师范大学学校 约400 余种，我国约有8 组55 种8 亚种，该属植 绿化科苗圃栽培的金丝桃属植物，分别是贯叶连翘 [1] 物产于全国各地，但主要集中于西南地区 . 金丝桃 (H.perforatum L)、小连翘 (H.erectum Thunb ex Mur－ 属植物中含多种药用成分，如金丝桃素类、槲皮 ray) 、元宝草 (H.sampsonii Hance)、浆果金丝桃(H. 苷、金丝桃苷、芦丁、黄烷酮醇类、黄酮类、咄酮 androsaemum Linn). [2] 类、香豆素类和间苯三酚衍生物(贯叶金丝桃素)等 . 1.2 总DNA 的提取 近年来的研究表明，金丝桃属植物所含金丝桃素类 采用改良的低pH 值高盐法，步骤如下: ① 取 化合物具有抗抑郁、抑制中枢神经、抗病毒和增强 新鲜植物叶片约0.4 g ，用70% 酒精洗6 s ，用蒸馏 免疫功能，并具有显著的抗DNA、RNA 病毒作用， 水清洗三次; ②把洗净的叶片于研钵中快速用液氮 [3] 可用于艾滋病的治疗，从而引起医药界的重视 . 研成粉末，将粉末转至 1.5 mL 离心管中; ③加入 1 [4] 本课题组曾发现金丝桃属植物的叶表皮微形态 、 mL 预冷的提取介质 (100 mmol ／ L pH 4.8 NaAc ，50 叶内部的分泌结构类型、分布密度、大小和位置[3] mmol ／ L pH 8.0 EDTANa2 ，500 mmol ／ L NaCl ，2