用ELISA检测稻飞虱的捕食性天敌X.pdfVIP

( ) 　 中山大学学报 自然科学版 　 　第 35 卷　第 5 期 A CTA 　SC IEN T IA RUM 　NA TU RAL IUM V o l. 35　N o. 5　 1996 年　9 月 UN IV ER S ITA T IS　SUN YA T SEN I Sep. 　1996 用 EL ISA 检测稻飞虱的捕食性天敌 张古忍　张文庆　古德祥 ( 中山大学昆虫学研究所, 广州 510275) 摘　要　利用酶联免疫吸附试验(EL ISA ) 方法测定了不同种类的捕食性天敌的阳性反应率 发现稻飞虱不同发育阶段的蛋白质组成一致, 所有捕食性天敌种类中以食虫沟瘤蛛、拟水狼蛛 的阳性反应率最高 关键词　EL ISA , 检测, 捕食者, 稻飞虱 分类号　 9681 Q 近 20 年来, 血清学方法得到进一步的完善和发展, 其中以酶联免疫吸附试验(EL ISA ) 最有应用前景, 它将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化作用有机地结合, 不仅大大提高 了测试的敏感性, 而且操作简便, 检测迅速 目前, 国外应用EL ISA 来评价捕食性天敌作用 [ 1～ 3 ] [ 4 ] 的工作已有报道 而国内除黄葵 等用 EL ISA 研究了粘虫的捕食性天敌外, 还未见其 ( 它报道 本文在建立 EL ISA 方法的基础上, 检测了稻飞虱 包括白背飞虱 S og a tella f u r cif era 和褐飞虱N ilap a rva ta lug ens) 的捕食性天敌, 以期鉴定稻飞虱的捕食性天敌种类 1　材料与方法 11　稻飞虱的养殖　将从田间采回的稻飞虱接入装有秧苗的养虫笼中饲养, 待成虫羽化 后, 分离褐飞虱和白背飞虱, 并分别接入养虫笼中, 进行隔离饲养, 然后逐步收集稻飞虱成虫 ( ) ( ) 和若虫, 并将若虫分为低龄 1～ 2 龄 和高龄 3～ 5 龄 收集到的稻飞虱虫体在室温下供水 饥饿 24 h 后移入- 20 ℃冰箱中保存 12　抗原的提取　将冰箱中保存的稻飞虱取出后称重, 倒入匀浆管中, 并加入适量的磷酸 ( ) 缓冲液 005 , 74 在匀浆液中加入过量的磷酸缓冲液, 在 4 ℃下搅拌 24 , 然 m o l L pH h ( ) , 分离上清液 沉渣重复抽提一次 将两次所得的上 后离心 4 000～ 5 000 , 20 r m in m in 清液混合后, 置于 4 ℃下更换多次冷盐水透析 24 h 或 48 h 透析液用冰冻干燥法或用聚乙 二醇(po lyethylene glyco l, 分子量 6 000) 30% 溶液反透析法进行浓缩 浓缩液再在 4 ℃下 透析 24 h , 然后用紫外分光光度计测定透析液的蛋白质含量, 即为抗原 13　抗血清的制备　从市场上买回的健康雄性新西兰大白兔, 编号饲养 15～ 20 d 采用耳 缘静脉注射法, 用适当浓度的抗原进行免疫 第三次注射后 2～ 3 d 采少量血并用试管沉淀 法测效价, 当效价达到 1 ∶29 时, 即可放血; 否则, 继续免疫 收集到的血液成斜面放