弓形虫分子生物学诊断和基因型鉴定的研究进展.pdfVIP

维普资讯 JoumalofTropicalMedicineVo1．7No．3Mar．2007 · 292 · 文【章编号】 1672—3619(2007)03-0292—04 · 综 述 · 弓形虫分子生物学诊断和基因型鉴定的研究进展 张翰 ，廖 申权，宋慧群，朱兴全 (华南农业大学兽医寄生虫学研究室，广州 510642) 摘【要】 弓形虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病，严重危害人体健康并给全世界的畜牧业造 成巨大的经济损失。但弓形虫病缺乏特异性临床症状和体征 ，诊断较为困难。传统的检测方法如病原学诊断、免 疫学检测等费时且不够稳定。而以核酸扩增技术为基础的分子生物学技术的迅速发展，如实时定量 PER(RT— PCR)、巢式一PCR和 PCR—RFLP等的应用 ，不仅为弓形虫病的诊断提供 了快速 、灵敏 、特异及稳定 的检测方法 ， 而且通过对病原基因型的分析鉴定为弓形虫群体生物学 、流行病学 、疫苗研究及对基因型和疾病模式之间潜在 的相关性研究等提供重要的依据。 【关键词】 弓形虫病；分子生物学技术；诊断；基因分型 中图分类号 ：R531．8 文献标识码：A 弓形虫病是一种由刚第弓形虫引起的呈世界性分布 准确性 [6．7】。 的人兽共患寄生虫病 ，严重危害人体健康且给全世界的畜 可动遗传因子 (MGEs)是一个具有高度变异性的重复 牧业造成很大的经济损失…1。但人和动物的弓形虫病缺乏 序列 ，它在每个细胞中有 100～500个拷贝，曾被用于样品中 特异性临床症状和体征，诊断较为困难。传统的检测方法 虫株型的鉴定[。但是没有被广泛采用。其它的一些单拷贝 有病原学诊断、免疫学检测等 。其 中病原学的诊断方法最 的序列。包括SAG1、SAG2、SAG3、SAG4和GRA4等9[-】，亦 为可靠 。但费时且易漏检：免疫学方法临床上使用较为普 应用于实验室的PER研究。弓形虫 1TS序列 已被作为分子 遍 。但因抗原含量少 ，抗体 出现较晚，不适合感染的早期检 标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定[13,14]。并显示 了其 测和对免疫功能缺陷患者的诊断。而以核酸扩增技术为基 高敏感性和高特异性。 础的分子生物学技术的迅速发展 ，不仅为弓形虫病的诊断 1。2 弓形虫的分子诊断方法 提供 了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法 ，而且通过对病 相对于靶基因的多样性。弓形虫的分子诊断方法也逐 原基因型的分析鉴定，为弓形虫群体生物学 、流行病学、疫 渐的多样化。以常规PER方法为基础 ，近年来又发展了巢 苗研究及对基因型和疾病模式之间潜在的相关性研究等 式 PER (nestedPER)、RT．PER、PER．ELISA以及免疫 PCR 提供重要的依据。本文就弓形虫病分子生物学诊断和基因 (I—PER)等技术 ，并逐步在 弓形虫病诊断中得以应用 ，进 型鉴定的研究进展作一综述。 一 步提高了PCR方法的敏感性和特异性。 常规 PCR方法操作简单 ，所需时间短 。是一种敏感 、 1 分子生物学方法在诊断弓形虫病上的应用 快速、特异的检测技术 。VANDEVEN等[】以Bl基因作为 1．1 弓形虫种特异性遗传标记 靶基因通过体外扩增检测临床上不同的病理组织和标本， 目前 ．在弓形虫病的诊断和检测中．使用最多的特异 并且与传统的弓形虫检测方法进行 了比较 ，认为PER方 性遗传标记是 Bl基因和 529bp序列。B