内皮抑制素基因在大肠癌中的表达和其临床意义.pdfVIP

内皮抑制素摹因在大肠癌中的表达及其临床意义 371 内皮抑制素基因在大肠癌中的表达及其临床意义 孝作祥郑树方永明潘月龙 内皮抑制紊(EIld06totin)是胶原XⅦ的COOH一末端片段，其分子量为20000。是一个进入 临床试验研究的新的血管生成抑制子“J。体内外的动物实验研究证实，nld0嘲血在体内显示 其恶性肿瘤的临床分期和患者预后密切相关“J。本研究通过RT—PcR方法检测了43例大肠 床分期和病理参数的关系。 材料与方法 《一)研究对象 随机选择本院收治的大肠恶性肿瘤手术病人43例。男性19例，女性24例。年龄介于 癌24例，管状乳头状腺癌11例，黏液腺癌7例，印戒细胞癌l倒。组织分化程度为高分化13 例，中分化21例，低、未分化9例。 I二)基因mRNA水平表达的测定及分析 所有的检测标本均来自外科手术切除的新鲜组织。经仔细检查分离出癌组织和远离癌肿 15 m的相对正常组织，立即置于液氮中，以用于之后的分析检测。细胞总RNA的抽提采用 Trizol dNTP 2m， 50 h，然后95℃5rain并立即置冰浴中 加灭菌超纯水至总量20皿。在室温置10ndn，420C反应1 mmol／LdNTPl mmol／LM酗2．5}d，10 m，7r蛔DNA聚合酶(2U，阻)0．5m(以上试剂均购自 TakaRa公司)，正义引物(10 pm棚阻)与反义引物(10 5’一A 7。PCR反应 Di画诅l Science Marker为相对分子量质量标准， 1D—gohKge，Vemion3．0软件分析系统，以DL2000DNA 作者单位：310啷杭州，浙江大学肿瘤研究所 中国癌症研究进展@ 对值。 (四)统计学分析 应用SPSS Test和Kmskal—Wallis1锄检验，分析肿瘤组 10．0统计软件，以Mann—Whitney 的关系。以P0．05为有统计学意义。 结 果 (一)大肠癌组织与其正常大肠组织的Endostatin表达 达，同时进行内对照口一actin的检测。43例大肠癌组织End06tatin表达(O．9244-o．376)明显高 于正常大肠组织(0．4494-0．227)。两组比较，有显著性差异(P=0．000)。 圈1El一PcR产生的tndestatin基因、内对照基嗣表达示例 M：IX．2000fh蠢k；1．2：大肠癌组织；3，4：JE常丈肠组织560 bp处为相对 应样本的endeetafin基因条带370坤处为内对照P一曲基因条带 表达 ． 达(1．147 篓 doetatin表达(O．8144-0．331)。两组比较，有显著 翟