大黄鱼mtDNA+ND5和cytb基因的克隆和序列分析.pdfVIP

撰毽ln‘ 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 大黄鱼mtDNA ND5和cytb基因的克隆与序列分析+ 李明云’张祖兴朱俊杰 (宁波大学生命科学与生物if_程学院，宁波，315211) 基因进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后直接测序。结果得到ND5的序列 表明：依据大黄鱼ND5序列所作的进化树总体支持传统的分类地位，大黄鱼更接近塘鳢鱼科． 而基于cytb基因所作的分析表明黑鳃梅童鱼是大黄鱼在石首鱼科中是遗传距离最小的；同时可以发现 ND5基因序列可以被用来研究鲈形目不同科之间鱼类的系统发育分析．本实验同时还预测出ND5和 cytb的氨基酸序列，为进一步研究打下坚实的基础，为大黄鱼的分子辅助育种和种质改良工 作提供了丰富的功能基因研究资料。 关键词：大黄鱼ND5 Cytb进化树 crocea 大黄鱼(Pseudosciaena 近海鱼类。大黄鱼是我国重要的经济鱼类，与小黄鱼、带鱼、鸟贼合称我国的“四大渔产”。 大黄鱼曾是我国重要的四大捕捞对象之一，也是闽浙两省的重要经济鱼类【2]。但随着大黄鱼 养殖业的发展，由，1：诸多闪素，大黄鱼的许多养殖性状出现了衰退的现象，如病害频发、生 长缓慢、性成熟提早、亲鱼个体小型化、品质下降等现象【3】。冈此开展大黄鱼的分子标记辅 助育种和基因改良T作就势在必行了。然而我们对大黄鱼的遗传背景的了解还很有限， GenBank中只记录有16SrRNA基㈥、GDF．8、生长激素基因、生长激素mRNA等基因。 线粒体作为细胞的产能细胞器，有“能最]二产”之称，普遍存在于各类真核生物中。线粒体具 有环状DNA及自身转录RNA与翻译蛋白质的体系【4】。很多学者把线粒体的遗传信息系统称为 真核细胞的第■遗传信息系统，或称核外基例及其表达体系。动物细胞每个线粒体中约含有6 个mtDNA分子例，许多哺乳动物成熟n勺红细胞缺少线粒体。基于线粒体在生命中的独特而重要 的功能，对线粒体上的基岗进行研究具有很大的理论和实践意义。在野生大黄鱼资源已受到严重 破坏的情况下，对线粒体DNA上的ND5的克隆与序列分析，有利于搞清大黄鱼的遗传背景和 促进大黄鱼资源的提纯复壮．1j作，为大黄鱼的人工养殖、人工放流和资源保护提供依据。 1材料与方法 1．1实验材料 作者简介：李明云(1942．)，男，教授，主要从事水产动物苗种繁育和种质资源保护研究。Email： limingyun@nbip．net 583 擅毽In 第三届海洋生物育技术论坛 200s．08．19-23 实验所用大黄鱼4尾取白浙江省象山县黄避岙良种育苗场，平均体长25．2cm，平均体重 150．29。活体带回实验室，断尾放血后取肌肉，．70。C保存备用。 1．2实验方法 1．2．1总DNA提取 大黄鱼的总DNA提取力‘法按高盐法，略加修改。总DNA通过琼脂糖凝胶电泳检验提取 质量：浓度通过紫外分光光度讣检验确认。 1．2．2 PCR及测序 PCR Buffer，模版DNA 25uL体系：2．59l 25rig，dNTP0．2／maol／1，引物1／maol／l，镁离子浓度 糖凝胶中回收，UNIQ．10柱式PCR产物纯化试剂盒纯化后直接进行序列测定，序列测定由 上海基康生物有限公司完成。采用的测序仪器为ABI公司的377型全自动DNA测序仪，双 向测序，并对测序结果进行人T核对、校正。 表1 奉实验所用的特异性引物 Tabl inthis divergentprimersapplied experiment 2实验结果 2．1大黄鱼总D№的提取质量 总DNA经琼脂糖凝胶电泳(图1)显示没有拖带现象产生，质量较好