N-乙酰半胱氨酸调控脑外伤后皮层炎性因子表达的实验的研究.pdfVIP

·269· 通路、多步骤对颅脑损伤生物标记物APP／A[3相关靶点进行干预，对建立颅脑损伤诊断标准、选择准确 的治疗策略以及预后判断有重要意义 参考文献(略) N一乙酰半胱氨酸调控脑外伤后皮层炎性因子 表达的实验研究 陈罡 吴江 朱巍巍张世明 周幽心 虞正权王中 周岱 史继新杭春华 brain 抗TBI后的氧化应激反应，保护神经元，在创伤性脑损伤(traumaticinjury，TBI)中具神经保护作 用¨-3J。这些报道主要研究NAC的抗氧化作用，很少涉及NAC在抗炎方面的效果，而脑组织炎性反应 在TBI后的继发性脑损伤中起重要作用”J，我们前期研究∞·钊也证实，Till后脑组织中将产生大量的炎 necrosis 症因子，如核因子KB(nuclearfactor—kappaB，NF—KB)、肿瘤坏死因子d(tumorfactor—Ot， adhesion molecule—l， ICAM一1)等，因此本研究探讨NAC是否对TBI后脑组织炎性因子表达具有调控作用。 材料和方法 1．模型建立和动物分组：18只雄性Wistar成年大鼠(中科院上海实验动物研究所)，体重250 ～300 g，随机分为：①对照组(6只)，仅在右侧顶部开骨窗而无脑损伤；②创伤组(6只)，20％乌拉坦腹 腔注射麻醉(1g／k)，用牙科钻于大鼠颅骨冠状缝后缘、中线右侧开直径5mm骨窗，保持硬膜完整。 cm处自由落体，致伤直径为4mm，深度5mill， 按Feeney自由落体撞击致伤方法【7J，以40g砝码于25 造成右顶叶脑挫裂伤；③NAC治疗组(6只)，同法造成右顶叶脑挫裂伤，伤后给予NAC注射剂(NAC粉 末，以生理盐水溶解为100 ms／ml溶液，美国Sigma公司)治疗，每次注射剂量为150ms／kg悼J，在伤后 15 min，12h，36h，60h分别腹腔注射一次，共注射4次。对照组和创伤组都注射等容量的生理盐水。 于伤后第72h再次麻醉动物，取脑挫裂伤周围的皮层组织[5]，一部分以10％中性福尔马林固定，一部 分冷冻于液氮中。 Bradford法【s J。EMSA检测试剂盒购自美国Promega公司，h。叩JATP购自北京原子能物理研究所。参 照试剂盒内说明书进行EMSA检测：取1．75 pmol／l忸l未标记的双链NF—KB寡核苷酸探针(5’一 AGTIGAGGGGAClTrCCCAGGC一3 V —KB探针2一，反应液18山)，混匀后室温放置20min，上样于聚丙烯酰胺凝胶样品孑L中，恒压150 电泳。电泳结束后轻轻揭下凝胶，放人暗盒中一70℃曝光、显影。NF—KB激活的阳性片状显色采用 KontronIBAS 2．0型全自动图像分析系统测量显色阳性区及背景阴性区的平均灰阶值。 3．酶联免疫吸附法(ELISA)测定脑组织炎症细胞因子浓度：将脑组织标本自液氮中取出，置于常 作者单位：215006苏州大学附属第一医院脑外科(陈罡、吴江、朱巍巍、张世明、周幽心、虞正权、王中、周岱)； 南京军区南京总医院脑外科(史继新、杭春华) ·270· 温下自融，研磨成组织匀浆，严格按照试剂盒内的说明书操作。TNF一仅试剂盒购自法国Diaclone公 司，IL—l 单位。 4．免疫组化测定脑组织ICAM—l的表达：①取4斗m的石蜡切片，二甲苯、乙醇脱蜡水化；②3％H： 0：封闭内源性过氧化物酶，常温，5min，双蒸水漂洗5min后，磷酸盐缓冲液漂洗15rain；③抗原修复： 切片置于10