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泛珠三角围产医学会议 会议交流
∥Nogo--A蛋白在HIBD新生大鼠大脑组织中的表达及其意义
刘仁红’,周晓光2,黄嘉言广州医学院第二附属医院新生儿科(广州,510260)
brain
目前,新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic
然是一个比较棘手的问题,有关其发病机制和治疗尚存在许多疑点。而脑组织在缺氧缺血
性损伤后再生困难的重要原因之一是Nogo—A等抑制神经生长的因子的存在,形成了一个不
利于神经再生与修复的微环境Ⅲ。Nogo—A即是多种神经生长抑制因子之一,它在特定条件
下有抑制神经生长的作用。到目前为止,有关Nogo—A抑制神经生长的作用方式、信号传导
途径、影响Nogo—A表达的因素尚不明确,深入研究该基因在中枢神经系统的表达具有重要
意义。本研究通过建立HIBD新生大鼠动物模型,并且采用免疫组织化学染色法研究Nogo-A
蛋白在HIBD新生大鼠神经组织的表达规律及其意义,为进一步的研究奠定基础。
1材料与方法
1.1动物分组与处理新生7天的SD大鼠,雌雄兼用。种鼠由广东省实验动物中心提供。饮
食为广东省实验动物中心提供的普通颗粒饲料,自来水,室温控制在15—24℃。动物随机分
天、28天四个亚组。新生鼠建模后置于母鼠身边喂养。
1.2标本的取材与Nogo-A检测
1.2.1标本取材依照实验设计,按时将动物经心脏灌注固定,即从左心室进针插入主动脉,
同时剪开右心耳。先灌注生理盐水,流出液清亮后换为多聚甲醛。取左侧大脑半球,放入4%
多聚甲醛溶液中后固定1天,再经10%、20%、30%蔗糖多聚甲醛溶液依次沉底后,冰冻切
片o
1.2.2
洗3次;滴加5%BSA封闭液,室温20min。3)甩去多余液体,不洗;滴加适当稀释的一抗
(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度
不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间:背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间),
37℃1小时左右或20℃时2小时左右,也可4C过夜。PBS(pH7.2—7.6)洗2min×3次。4)
min
min。PBS(pH7.2—7.6)洗2
滴加生物素化山羊抗小鼠IgG(或兔、人IgG),20—37℃20
20
X3次。5)滴加试剂SABC,20-37Cmin。PBS(pH7.2—7.6)洗5
各l滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5—30min之间。PBS洗
294
泛珠三角围产医学会议 会议交流
涤。裱片,晾干。脱水,透明,中性树胶封片。
为检验本实验的专一性和可靠性,同时用PBS代替一抗作对照,结果为阴性。
1.2.3图像采集与统计学处理各组实验鼠脑组织切片完成免疫组化染色后,统一采用M100
,
●
像分析。每张脑组织切片均取相同位置的8个高倍视野数出阳性信号数量,算出平均数。然
后利用SPSSI
显著性界限。
2结果
2.1
后,在新生鼠海马齿状回及大脑皮质中神经元高度密集,出现较强的Nogo—A免疫阳性反应,
阳性物质呈棕黄色。高倍显微镜下可见新生鼠海马区和大脑皮质中Nogo—A免疫反应阳性物
质仅存在于神经元胞浆及突起内,而胞核为阴性。
较深,定位于皮层的第1II层。Nogo—A在海马前下托与胼胝体呈强阳性信号,并形成明显的阳
性细胞带,染成棕黄色;而在海马内的表达呈弱阳性,仅在海马的齿回见部分散在的Nogo-A
阳性神经元,染为淡黄色,而海马的其他区域则极少见到阳性神经元。
在假手术组脑组织切片中也可见到Nogo—A阳性细胞,免疫反应阳性物质仅存在于神经
元胞浆及突起内。阳性细胞散在分布,染色较淡。
2.2
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