禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内动态分布.pdfVIP

禽支气管炎病毒Jin-13分离株在SPF鸡体内的动态分布 李欢l扣，杨霞1，赵军，陈陆，王新卫，常洪涛，李永涛，刘红英，王泽霖，王川庆2 (河南农业大学禽病研究所，郑州450002) 基因设计并合成一对引物，建立了检测IBVSYBRGreenI荧光定量PCR方法。人工感染90日龄SPF鸡l，、4、7、10、 14、21、28、35天后检测心脏、肝脏、脾脏、肺脏、气管、肾脏、十二指肠等内脏器官病毒载量，以研究体内病毒复 制动态及分布情况。该方法在7．77×108～100 copies·gL’1范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中 肝脏和十二指肠。攻毒10日后各组织内含量均逐渐降低。肝脏于攻毒后21日时已检测不到IBV。于攻毒后第28臼肾 脏、气管和肺脏仍能检测到IBV。心脏可持续带毒35天。本研究为解释IBV的持续排毒及不同血清型IBV毒株均具 有非常严重的致肾损伤现象提供了参考依据。 关键词：传染性支气管炎病毒：Jin．13分离株：SPF鸡：荧光定量PCR；动态分布； Bronchitis 禽传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(InfectiousVirus， IBV)引起的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病¨J。该病呈世界性分布，常在产蛋鸡和肉鸡中引 发疾病。由于其较高的发病率和产品淘汰率使养禽业蒙受了很大的经济损失。IBV可导致发病鸡出现 气管哕音、咳嗽、打喷嚏、增重减慢、产蛋下降和品质降低等临床症状，另外还可引起泌尿系统、生 殖系统疾病以及细菌性的继发感染【2】。目前防 控本病的常用方法仍是接种疫苗，包括传统疫苗和大量的基因工程苗ljJ。虽然有一定的免疫 保护效果，但是由于IBV血清型众多、致病性复杂，不同血清型之间抗原性差异较大，因此，免疫 效果往往不理想，临诊病例仍时有发生。确诊本病的主要依据是病毒的分离鉴定或检测，但是，传统 方法消耗大量的人力物力，因此很难在生产实际中推广运用。随着检测技术的快速发展，实时荧光定 量PCR技术已广泛应用于各个领域，其检测灵敏度比常规PCR高约100倍，避免了常规方法带来的 弊端，不需要进行繁琐的病毒分离培养，简化了检测步骤，提高了检测效率和准确性。近年来诸多学 者[4】分别使用染料法和探针法设计了针对IBV的实时荧光定量PCR方法，均表现出了该检测方法的 优越性。 IBV是尼多病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属的代表种，为外被囊膜的单股正链RNA病毒。病 蛋白、膜(Membrane，M)糖蛋白和小膜(Small 和生殖道为特征(6】，这可能与动物感染后病毒在体内的分布状态有关。周俊芳【7j等和樊汶樵等拶j分剐 以常规PCR和荧光定量PCR方法测得了M41疫苗株在鸡体内的动态分布，但迄今为止对有关流行毒 Green 株在感染鸡体内动态分布的报道相对较少。本研究利用SYBR I荧光定量方法对人工感染SPF 鸡体内流行强毒Jin．13株IBV复制动态进行研究，从而探讨其在鸡体内的组织嗜性及分布情况，为 解释其临诊致病特点，特别是病理变化特征提供参考依据。 l材料与方法 IBV 1．1毒株与实验动物 Jin一13株由河南农业大学传染病实验室自行分离、保存19J。新城疫病毒 1GB2D000007) 27基金项目：农业科技成果转化资金项目(201 1．同为第一作者。作者简介： 李欢(1988一)，女，河南平顶山人，硕士研究生，学生，主要从事疫病发病机理及免疫防治研究。 杨霞(1973一)，女，博士，河南扶沟人，副教授，主要从事疫病发病机理及免疫防治研究。 2．通讯作者：王川庆，教授。TeiEmail：w—chu—anq@—163—,com 356 济南斯帕法斯家禽有限公司，喂养于负压隔离器内。 1．2荧光定量PCR引物设计及合成根据IBVJin．13株N基因序列(Gen 设计一对引物(表1)。由上海生物。口呈技术有限公司合成。 表l 实时荧光定量PCR引物