极大螺旋藻多糖结构研究.pdfVIP

极大螺旋藻多糖的结构研究 上海水产大学(上海200090)冯建林严伯奋 擅要本文以热水漫提极大螺旋藻粉、得到租多糖，再经三氯乙酸法和Scrag法去蛋白，两次Sephadex G一200柱层析后，得到纯多糖．经薄层层析和GC测得该多糖由D·葡萄糖(649％)、L一鼠李糖(10． 氧化实验、红外光谱和“C-NMR图谱推潞了多糖糖链的可能结构． 关量词极大螺旋藻{多糖，单糖组成；糖链结构 螺旋藻营养丰富，而且含有多种生理活性物质“]，被公认为“人类朱来的优秀粮食资 源”。螺旋藻多糖是一种水溶性多糖，对机体具有多方面的生理活性。为进一步开发利用 螺旋藻多糖，国内外许多学者正在研究螺旋藻多糖的化学结构并努力揭示其化学结构与 生理活性的关系。 Of 本文以极大螺旋藻粉为原料，提取纯化得螺旋藻多糖(Polysaccharide 红外图谱和13c—NMR图谱推测了糖链的可能连接方式。 一、提取与纯化 1．1原料：极大螺旋藻干粉，由上海强生微藻发展中心提供。 1．2实验方法 1．2．1粗多糖的提取： 螺旋藻粉经两次热水浸提，离心，取上清液，浓缩，加乙醇沉淀多糖口]，静置，离心，沉 淀先后用丙酮、无水乙醚洗涤后真空干燥，得螺旋藻粗多糖。 1．2．2去蛋白方法o。1 1．2．2．1 Sevag法 1．2．2．2三氯乙酸法 称取粗多糖溶解成5％的溶液，加入30％三氯乙酸至溶液中三氯乙酸浓度为15％， 静置过夜。次日离心，上清液透析，浓缩至适当体积，加三倍体积乙醇，静置、离心，沉淀先 后用丙酮、无水乙醚洗涤后真空干燥，得去蛋白的螺旋藻多糖。 1．2．2．3胰蛋白酶、术瓜蛋白酶复合酶法03 1．2．2．4硫酸铵法 取粗多糖溶液加入晶体硫酸铵【61，使硫酸铵饱和度为80％，静置过夜，次日离心，上 清液透析，浓缩，干燥。 1．2．3柱层析法 1．2．3．1 DEAE纤维素梯度洗脱法o’81 试剂：nFAE一：e!!ulo=：DE一52，WhdE．1aa进口分装 柱：2．2×37cm ·】49· 初始缓冲溶液：0．001NNaH2PO·--Na2HP04，pH7·00 NaCI) 极限缓冲溶液：0．001NNaH2P04--Na2HPOl，pH7．00(含4．ON 洗脱速度：lSm[／hour 每隔20分钟分部收集，并以苯酚一硫酸法[91检测糖浓度的变化，以Lowry法在 500nm处测量吸光值“o]检测蛋白浓度变化。 1．2．3．2SEPHADEXG-200法[8】 G--Z00pharmacia Sephadex 柱： 2．6×47cm 洗脱液：0．001NNaH2PO‘--Na2HPO‘，pH7．0 流速{ 9ml／hour 检测方法： 每20分钟收集一管，苯酚一硫酸法检测浓度变化，Lowry法检测蛋白 浓度变化，” 1．2．4 G一200法和醋酸纤维薄膜法“7 r纯度鉴定方法：SEPHADEX 1．3：结果与讨论。 ’ 1．3．1关于去蛋白方法的讨论 经实验比较Sevag法，兰氯乙酸法，硫酸铵法及胰蛋白酶、木瓜蛋白酶复合酶法去蛋 白的效果，从蛋白残留量和糖得率两方面评价，认为三氯乙酸法较好。但经兰氯乙酸法操 作后，仍有一定的蛋白残留。所以，本实验采取三氯乙酸法去除螺旋藻粗多糖中大量蛋白 后，再经两次Sevag法去除少量的残留蛋白， 寰1几种去蛋白方法效果啦较 1．3．2关于柱层析 1．3．3．1 DEAE--纤维索柱层析和SephadexG一200柱层析结合法