草莓、番木瓜、猕猴桃遗传转化探究初报.pdfVIP

园艺学进展 (第五辑) 343 草苟、番木瓜、称猴桃遗传转化研究初报 马 英’,3林顺权2 吕柳新3 (’福建农林大学园艺学院，福州350002; s华南农业大学园艺学院，广州 510642; 〕厦门大学细胞生物 学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，厦门361005) 摘 要 本文以根癌农杆菌LBA4404,EHA105为介导，“叶盘法”转化草落、番木瓜、称猴 桃等3种果树，以Gus瞬时表达评价转化效率，优化了转化条件，初步建立了这3种果树的遗传 转化体系。 关健词 草薄;番木瓜;称猴桃;遗传转化 现代生物技术特别是遗传转化技术的发展为果树品种改良开辟了新途径。果树遗传转化 研究较粮食等其他重要经济作物起步较晚，且果树离体培养再生植株本身较困难，因而高效 再生体系及转化体系的建立是目前果树基因工程研究的重点。 本文以草毒、番木瓜、称猴桃3种果树为材料，以根癌农杆菌介导， “叶盘法”转化， 初步建立了这3种果树的遗传转化系统，为进一步应用遗传转化方法改良果树品种提供一定 的实践基础。 1材料与方法 1.1植物材料 3种果树试管苗。草夸品种:丰“香”、“明宝，，;番木瓜品种:“台农一号”、“台农六号”; 赫猴桃品种:“中华称猴桃”、海“福特”。 1.2菌株和质粒 根癌农杆菌LBA4404,EHA105,AGL1;植物表达载体pl301HBS:含外源基因乙肝表面 抗原基因(HBrAg)[11、植物抗性筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因(碗)、报告基因月一葡搪 昔酸酶基因 (Gus)及质粒抗性标记基因 (kanr). 1.3 培养墓 草毒:CM:MS+BA3+IAA2+3%Sue+0.75%Agar(BA3即BA3m-L-g ，下同);番木 瓜:FMC:MS+BA0.5+2,4一Dl+3%Sue+0.75%Agar;琳猴桃:MHT:MS+ZT2+Ad20+ 3%Sue+0.75%Agar. 1.4Gus((3一葡箱昔酸酶)墓因瞬时表达活性检测 分别取4块转化体置于X一glue缓冲液，37C9温浴12h，乙醇脱色后在解剖镜下观察蓝斑 数和蓝斑的颜色。 2 结果与讨论 2.13种果树叶盘外植体对卡那.索 (Kan)的敏感性试验 在预备试验的基础上，对草毒叶盘、称猴桃叶盘设20,25,30,40mgL-’等4个浓度梯 344 马英等:草萄、番木瓜、琳猴桃遗传转化研究初报 度 对番木瓜叶盘设50,75,100,120mgL-等‘4个浓度梯度，进行卡那霉素的耐受性试 验 结果见表to 表13种果树叶盘外植体对Kan的耐受性 Tal触 1The加1erance浦leaf口ate叮山ree介dtspeciestoKan Kan(mgL-) 草游叶盘 称猴桃叶盘 Kan(mgL-) 番木瓜叶盘 Strawberrylea]口ate Kiwifruitleaf1妇沈 Papayaleaf口ate 大部分叶盘仍保持绿色，少数 叶盘生长能力受阻，但 部分叶盘切口处膨胀，有 有愈伤组织产生 仍可产生愈伤组织 少量愈伤组织形成 叶盘再生能力收到相当抑制， 叶盘不能产生愈伤组织，但在 仅少数叶盘产生愈伤 无愈伤形成，但3周后叶 长时间内保持绿色，部分叶盘 组织，部分叶盘黄化 盘仍未死亡 黄化 o o 叶盘生长受抑，不能形成愈伤 不能产生愈伤，绝大部 无愈伤形成，叶盘逐渐白 或芽，大部分叶盘黄化 分叶盘黄化、白化 化死亡 叶盘黄化、揭变死亡 叶盘黄化死亡